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文檔簡介
1、葫蘆科作物有多種種傳病毒，植物檢疫部門如何同時快速檢測這些病毒的問題有待解決。番木瓜環(huán)斑病毒(PapayaRingspotVirus，PRSV)是葫蘆科作物的種傳病毒之一，本研究開展了葫蘆科作物種子上的PRSV的分子檢測研究，可以為解決上述問題提供借鑒。 以?？凇⒎鼋?、鄭州、漳州等地采集回來的葉片樣品為材料，首先通過雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附分析(DAS-ELISA)的方法對所采集的葉片樣品進行檢測。在獲得初步結(jié)果的基礎(chǔ)上利用RT-
2、PCR的方法進行檢測。在確認葉片所攜帶的病毒為PRSV后，利用梯度PCR的方法及調(diào)整TaqDNA聚合酶濃度的方法確認退火溫度為56℃的條件下使用2U的Taq酶可獲得最佳RT-PCR檢測結(jié)果。在優(yōu)化后的PCR條件下，以西葫蘆種子為樣品，采取液氮研磨及TRIzol的方法提取PRSV的總RNA并進行檢測，同時播種獲得葉片后用DAS-ELISA的方法進行驗證。最終建立一套可以直接從種子中檢測PRSV的RT-PCR檢測方法，為檢疫部門提供了可以參
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