腺苷2A受體、血管活性腸肽在偏頭痛模型大鼠腦干及三叉神經(jīng)節(jié)的表達(dá)變化.pdf

1、偏頭痛是一種常見的發(fā)作性神經(jīng)血管功能紊亂性疾病，已成為嚴(yán)重影響患者工作和生活的慢性病之一。其病因及發(fā)病機(jī)制目前尚無定論，致使藥物治療靶點(diǎn)各異。 腺苷2A受體(adenosine 2A receptor，A2AR)屬G蛋白偶聯(lián)受體家族，可以與不同的G蛋白和蛋白激酶偶聯(lián)，產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，腺苷在其受體介導(dǎo)下調(diào)節(jié)著運(yùn)動、神經(jīng)元保護(hù)、睡眠、覺醒、疼痛、藥物成癮、腦卒中、神經(jīng)退行性疾病等及其他重要的病理生理過程。

2、血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)是一種腦腸肽，屬于胰高血糖素/促胰液素族，廣泛分布于中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)中，具有調(diào)節(jié)平滑肌張力及神經(jīng)內(nèi)分泌功能、神經(jīng)元保護(hù)等多種重要的生物學(xué)功能。 Sebastiao和Cunha等發(fā)現(xiàn)A2AR的激活可增強(qiáng)VIP對GABA釋放的作用和降鈣素基因相關(guān)肽(calciltonin gene-telated peptide，CGRP)在突觸傳遞的作用。Hoho

3、ff等分析了265例MA/Mo(migrainewith aura/migraine without aura)患者A2AR基因6個(gè)標(biāo)記的單體型在MA_病人的頻率，證實(shí)A2AR基因變異與MA的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。Ledent等發(fā)現(xiàn)A2AR基因敲除鼠出現(xiàn)痛覺減退。A2AR、VIP兩者共同與偏頭痛的關(guān)系目前仍不清楚，國內(nèi)外未見報(bào)道。 氟桂利嗪是長效非選擇性的鈣通道阻滯劑。國內(nèi)外研究證實(shí)氟桂利嗪不但能有效地減少頭痛的發(fā)作頻率，減輕頭痛的嚴(yán)重

4、程度，且副作用較輕，是一種安全有效的偏頭痛預(yù)防性治療藥物。 本研究將建立硝酸甘油型實(shí)驗(yàn)性偏頭痛大鼠模型，并利用氟桂利嗪進(jìn)行干預(yù)，檢測腦干及三叉神經(jīng)節(jié)組織中A2AR mRNA及蛋白的表達(dá)和VIPmRNA及組織含量，比較上述各物質(zhì)在發(fā)作期與間歇期的表達(dá)變化，以探討A2AR、VIP與大鼠偏頭痛的關(guān)系。 方法: 1.動物分組及處理：以清潔級Sprague-Dawley (SD)大鼠為實(shí)驗(yàn)對象，模型組：依Tassorell

5、i法皮下注射硝酸甘油注射劑10mg/kg，每周1次，共5周，制作實(shí)驗(yàn)性偏頭痛模型，并于第2次造模后給予生理鹽水10ml/kg/d灌胃，共4周；生理鹽水對照組(簡稱對照組)：與模型組同步對照，以生理鹽水注射代替硝酸甘油注射；藥物干預(yù)組(簡稱干預(yù)組)：注射硝酸甘油制作實(shí)驗(yàn)性偏頭痛模型，自第2次造模后給予氟桂利嗪5mg/kg/d灌胃，共4周。 2.取材：發(fā)作期組和間歇期組分別于第5周造模后3h或4d，斷頭處死大鼠后取腦干及三叉神經(jīng)節(jié)組

6、織。液氮內(nèi)保存。 3.RT-PCR法半定量檢測大鼠腦干及三叉神經(jīng)節(jié)組織A2AR、VIPmRNA的表達(dá)量。 4.Western-Blot法檢測大鼠腦干及三叉神經(jīng)節(jié)組織A2AR蛋白的表達(dá)量。 5.放射免疫法測定大鼠腦干及三叉神經(jīng)節(jié)組織VIP含量。 結(jié)果: 1.模型組和干預(yù)組大鼠腦干及三叉神經(jīng)節(jié)組織的A2AR mRNA和蛋白表達(dá)水平在偏頭痛發(fā)作期均明顯高于對照組(P<0.05)，而在偏頭痛間歇期，表達(dá)無

7、明顯變化(P>0.05)。 2.模型組及干預(yù)組大鼠腦干及三叉神經(jīng)節(jié)組織的VIP含量在偏頭痛發(fā)作期明顯高于對照組(P<0.05)，而在偏頭痛間歇期，表達(dá)均無明顯變化(P>0.05)：VlPmRNA表達(dá)水平在偏頭痛發(fā)作期和間歇期無明顯變化(F>0.05)。 結(jié)論: 1.A2ARmRNA及蛋白和VIP組織含量表達(dá)上調(diào)可能與大鼠偏頭痛發(fā)作有關(guān)。 2.氟桂利嗪可以減輕偏頭痛的發(fā)作，但與A2AR、VlP表達(dá)量的改變無