探討炎癥因子對(duì)體外培養(yǎng)三叉神經(jīng)節(jié)的影響.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)完整三叉神經(jīng)節(jié)組織，建立一種能夠易于控制的類(lèi)似三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)環(huán)境過(guò)程的生物活性體系。探討腫瘤壞死因子（TNF-α）對(duì)其體外培養(yǎng)三叉神經(jīng)節(jié)的三叉神經(jīng)細(xì)胞降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）的影響及水平變化。
　　方法：18只 SD大鼠急性分離左右兩個(gè)三叉神經(jīng)節(jié)，完整獲取36個(gè)三叉神經(jīng)節(jié)后，取12個(gè)用4％多聚甲醛固定，余下24個(gè)行體外培養(yǎng)培養(yǎng)6天后，分為正常組12個(gè)和實(shí)驗(yàn)組12個(gè)。正常組繼續(xù)換液，對(duì)實(shí)驗(yàn)組的處理：將配制好一定濃度的

2、腫瘤壞死因子（TNF-α）加入 DMEM培養(yǎng)液中，與 SD大鼠三叉神經(jīng)節(jié)離體培養(yǎng)24 h。然后通過(guò) HE染色觀察體外培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)組和新鮮未培養(yǎng)組的神經(jīng)元的細(xì)胞變化,再通過(guò)免疫組化技術(shù)和蛋白技術(shù)兩種方法，觀察加入 TNF-α前后CGRP的水平變化，分析TNF-α對(duì)體外培養(yǎng)三叉神經(jīng)節(jié)的影響。
　　結(jié)果：1.新鮮未培養(yǎng)組和常規(guī)培養(yǎng)組的 HE染色表明體外培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞未發(fā)生明顯的組織細(xì)胞水腫、變性、壞死和細(xì)胞凋亡等病理學(xué)改

3、變。2.蛋白印跡技術(shù)表明常規(guī)培養(yǎng)組和炎癥因子實(shí)驗(yàn)組比，腫瘤壞死因子（TNF-α）使CGRP表達(dá)水平上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），進(jìn)一步證明了炎癥因子參與三叉神經(jīng)痛的發(fā)病機(jī)制。3.免疫組化染色顯示離體培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組內(nèi)都有 CGRP免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),對(duì)照組圖表達(dá)量相對(duì)較低,實(shí)驗(yàn)組CGRP陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)表達(dá)水平顯著增高，CGRP陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)棕褐色,胞體染色深淺不一,部分細(xì)胞中心部位著色淺,周?chē)麧{點(diǎn)狀著色較深。4

4、.對(duì) CGRP的免疫組化切片圖像進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果顯示炎癥因子實(shí)驗(yàn)組 CGRP陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)除平均面積外，平均光密度、平均積分光密度、平均灰度值顯著高于對(duì)照組(P<0.01)
　　結(jié)論：炎性因子TNF-α可顯著使離體培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元CGRP表達(dá)水平上升。從細(xì)胞形態(tài)分析，離體培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)方法可行，并且能夠易于控制三叉神經(jīng)節(jié)組織生存的內(nèi)環(huán)境，對(duì)于形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)研究易于實(shí)施，是一種三叉神經(jīng)功能活動(dòng)發(fā)生機(jī)制和藥物開(kāi)發(fā)研究