失神經(jīng)對幼兔干骺端損傷愈合影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：骨折愈合是一個(gè)非常復(fù)雜的創(chuàng)傷修復(fù)過程，并受諸多因素的影響和調(diào)控，其中神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用占有非常重要的地位。研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)纖維通過釋放多種神經(jīng)遞質(zhì)分子發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，具體的調(diào)節(jié)機(jī)制尚不完全清楚。在臨床工作中發(fā)現(xiàn)兒童干骺端骨折合并周圍神經(jīng)損傷很常見，但是周圍神經(jīng)對干骺端骨折愈合影響及其調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步研究。 本實(shí)驗(yàn)通過建立失神經(jīng)支配的脛骨干骺端損傷模型，然后通過多種物理檢查及鏡下觀察的方法比較實(shí)驗(yàn)組和對照組之間干骺端愈合情況差異

2、。探討周圍神經(jīng)損傷后對脛骨干骺端損傷愈合的影響及其可能的調(diào)控機(jī)制，為從改善神經(jīng)功能入手來促進(jìn)兒童干骺端骨折愈合提供理論依據(jù)。 方法：選用健康新西蘭幼兔40只，兔齡4-6周，體重1.0～1.5kg，無菌條件下在左后肢膝關(guān)節(jié)前面脛骨結(jié)節(jié)水平設(shè)計(jì)縱形切口，暴露脛骨近端干骺端及骺板，骺板顯示為白色細(xì)線狀，自脛骨內(nèi)側(cè)面骺板下方0.5cm處，應(yīng)用直徑3mm動(dòng)力鉆與骺板平行方向鉆孔，形成長約1cm的骨缺損，注意不要傷及骺板及關(guān)節(jié)軟骨。骨缺損型

3、干骺端損傷較穩(wěn)定，患肢不必行內(nèi)外固定。將所有實(shí)驗(yàn)幼兔隨機(jī)分為兩組：失神經(jīng)支配干骺端損傷組(實(shí)驗(yàn)組)，保留神經(jīng)支配干骺端損傷組(對照組)。無菌條件下將實(shí)驗(yàn)組幼兔左側(cè)后肢坐骨神經(jīng)和股神經(jīng)切斷并切除1cm。術(shù)后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于籠內(nèi)，動(dòng)物飼養(yǎng)選用標(biāo)準(zhǔn)飼料統(tǒng)一喂養(yǎng)，注意保溫，預(yù)防傷口感染。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別在術(shù)后第1，2、4、8周兩組隨機(jī)抽取5只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，空氣栓塞處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，進(jìn)行放射學(xué)檢查，觀察各組動(dòng)物骨缺損區(qū)的骨癡生長和骨橋的連接情況。取出雙側(cè)脛骨

4、剝?nèi)ス侵車能浗M織，肉眼觀察骨痂生長情況。隨后置于雙能X線骨密度儀下測量，以脛骨骨痂為中心，進(jìn)行脛骨干骺端骨痂密度檢測。后將干骺端損傷部位愈合骨痂取材，分別行光鏡檢查，進(jìn)行組織學(xué)分析，評(píng)價(jià)骨折愈合情況及骨痂質(zhì)量。整理數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出結(jié)論。結(jié)果：X線檢查結(jié)果：術(shù)后1周兩組無明顯差異，干骺端可見不規(guī)則透亮區(qū)，密度較混雜。術(shù)后2周兩組干骺端均出現(xiàn)條帶狀高密度影，實(shí)驗(yàn)組骨痂量較多，但密度較對照組低不均勻。術(shù)后4周實(shí)驗(yàn)組骨痂量較對照組多，

5、密度混雜。術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組仍有大量骨痂，骨痂突出于骨皮質(zhì)表面，密度混雜不均，對照組外骨痂逐漸塑形成熟，接近正常骨組織。骨密度測定兩組骨痂密度均進(jìn)行性增加，術(shù)后1周兩組骨密度：0.16±0.03，0.18±0.04，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，早期主要以纖維及軟骨組織修復(fù)為主；術(shù)后2周：0.29±0.02，0.34±0.04，兩組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；術(shù)后4、8周骨密度兩組有顯著差異(p<0.05)。(注：骨密度為與正常側(cè)的比值)。脛骨近

6、端大體標(biāo)本肉眼觀察：術(shù)后1、2周兩組骨痂以纖維性骨痂為主，質(zhì)地較軟。術(shù)后4周實(shí)驗(yàn)組骨痂量較對照組多，填充骨缺損。術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組骨痂明顯突出于骨表面，呈過度性骨痂生長，但強(qiáng)度較差；對照組干骺端骨缺損處骨痂填充，較平整，質(zhì)地接近正常骨組織。光鏡進(jìn)行組織學(xué)觀察：術(shù)后第1周，實(shí)驗(yàn)組大量纖維組織增生，有少量細(xì)小新生骨小梁形成；對照組纖維組織增生活躍，有較多量粗大新生骨小梁形成，其外周可見成骨細(xì)胞。組織學(xué)評(píng)分結(jié)果術(shù)后1周兩組：2.6±0.8，3.3

7、±0.9，兩組無明顯差異(P>0.05)。術(shù)后第2周，實(shí)驗(yàn)組新生骨小梁形成增加，但骨痂生長稀疏、密度較低、排列絮亂；對照組有較多編織骨形成，成熟度較高，骨痂較致密、順力線排列，呈柵欄狀。兩組組織學(xué)評(píng)分：4.5±0.9，5.7±0.7，兩組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。術(shù)后4周實(shí)驗(yàn)組編織骨形成、成熟度較低，骨痂較多，但相對稀疏，骨小梁較窄，類骨質(zhì)較厚；對照組編織骨進(jìn)一步增多成熟并逐漸融合，新骨連接成片，排列規(guī)則，骨小梁較寬、致密，骨小

8、梁間間隙縮小。評(píng)分結(jié)果：5.6±0.7，7.2±0.8，兩組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組骨痂過度生長，成熟度低，排列紊亂稀疏；對照組骨痂鏈接成片，順力線排列規(guī)則，結(jié)構(gòu)接近正常骨組織。組織學(xué)評(píng)分結(jié)果具有顯著差異。CGRP免疫組化染色觀察，術(shù)后1周實(shí)驗(yàn)組骨痂中可見少許CGRP陽性表達(dá)，呈散在點(diǎn)狀分布，染色呈淡黃色；對照組骨痂組織中即可見CGRP陽性表達(dá)，多沿血管呈灶性分布，染色呈棕黃色。術(shù)后2、4周實(shí)驗(yàn)組骨痂中僅有極低水

9、平的CGRP表達(dá)；對照組在編織骨邊緣有大量CGRP免疫陽性神經(jīng)纖維分布，并逐漸增加，染色明顯加深呈深褐色。術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組CGRP表達(dá)水平仍極低；對照組仍有較多CGRP陽性表達(dá)，但較術(shù)后4周時(shí)明顯減少，染色呈棕色。結(jié)論：1、周圍神經(jīng)系統(tǒng)在骨折愈合過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，對干骺端損傷愈合的調(diào)節(jié)作用尤為突出，切斷坐骨神經(jīng)和股神經(jīng)影響脛骨干骺端骨缺損型骨折骨痂形成的速度和質(zhì)量，使干骺端骨缺損損傷局部形成大量有缺陷的骨痂，所以，恢復(fù)神經(jīng)支配是

10、干骺端損傷愈合所必需的。2、周圍神經(jīng)系統(tǒng)對干骺端骨代謝及其成骨塑形作用具有調(diào)控作用，從而完成骨的正常生長發(fā)育和損傷修復(fù)過程。3、周圍神經(jīng)對骨折愈合的調(diào)控可能是通過分泌多種神經(jīng)肽介導(dǎo)的。神經(jīng)肽通過復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)系統(tǒng)發(fā)揮其調(diào)控作用，但該網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)中各因素之間的協(xié)調(diào)/拮抗作用尚待進(jìn)一步研究闡明。4、周圍神經(jīng)系統(tǒng)可促進(jìn)骨折部位鈣、磷的沉積，促進(jìn)類骨質(zhì)礦化，促進(jìn)骨痂成熟，使骨小梁正常重建，并順力線排列。5、干骺端骨折合并周圍神經(jīng)損傷者應(yīng)及早處理，以