補(bǔ)肝散含藥血清對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞膜PBR表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討補(bǔ)肝散含藥血清對(duì)肝星狀細(xì)胞(HSC)的增殖、周期及凋亡的影響，并從外周型苯二氮卓類受體(PBR)角度探討其作用機(jī)制，為中醫(yī)藥防治肝纖維化提供新的理論依據(jù)與藥物來(lái)源。 方法：制備5％、10％、20％補(bǔ)肝散含藥血清的培養(yǎng)液作為治療組用藥，與不含大鼠血清的空白組(培養(yǎng)液只含10％胎牛血清)對(duì)照，與不含補(bǔ)肝散含藥血清的不含藥血清組對(duì)照．解凍、傳代培養(yǎng)HSC-T6株，在含不同濃度補(bǔ)肝散含藥血清的培養(yǎng)液的作用下，采用MTT法檢測(cè)細(xì)

2、胞的增殖程度，用酶標(biāo)儀測(cè)定各組吸光值，計(jì)算不同濃度補(bǔ)肝散含藥血清對(duì)細(xì)胞增殖的抑制率，并采用流式細(xì)胞儀測(cè)定各組細(xì)胞在不同周期的細(xì)胞數(shù)量所占的比例，反映細(xì)胞周期的進(jìn)程及增殖情況。在PBR表達(dá)的不同階段，采用流式細(xì)胞儀分別測(cè)定各組細(xì)胞在補(bǔ)肝散含藥血清作用下的細(xì)胞凋亡指數(shù)，同時(shí)通過(guò)采用放射免疫法檢測(cè)PBR特異性配基[3H]PK11195結(jié)合量探討細(xì)胞凋亡與PBR的關(guān)系。 結(jié)果： 1.補(bǔ)肝散各含藥血清組對(duì)HSC增殖的抑制率與空白組

3、比較均有顯著差異(P<0.01)，其中20％含藥血清組效果最好，其對(duì)HSC增殖的抑制作用最強(qiáng)；10％含藥血清組效果次之；5％含藥血清組對(duì)HSC增殖的抑制率最低。不含藥血清組作用與空白組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2.隨著補(bǔ)肝散含藥血清濃度的增加，G0/G1期細(xì)胞比例有所增多，S期細(xì)胞比例逐漸下降，G2/M期細(xì)胞比例亦逐漸減少，補(bǔ)肝散各含藥血清組作用與空白組比較意義顯著，但各含藥血清組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.0

4、5)。表明補(bǔ)肝散含藥血清可以使HSC周期進(jìn)程減緩，發(fā)生G0/G1期停滯。 3.在HSC培養(yǎng)的各個(gè)時(shí)段，隨著補(bǔ)肝散含藥血清濃度的增加，細(xì)胞的凋亡指數(shù)明顯增加，其中，10％含藥血清組和20％含藥血清組效果明顯優(yōu)于5％含藥血清組(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)的第11天(細(xì)胞傳代培養(yǎng)后1天)和第13天(細(xì)胞傳代培養(yǎng)后3天)，20％含藥血清組效果明顯優(yōu)于10％含藥血清組(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)的第15天(細(xì)胞傳代培養(yǎng)后5天)、第17天(細(xì)胞傳代培養(yǎng)

5、后7天)20％含藥血清組與10％含藥血清組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4.在HSC培養(yǎng)的各個(gè)時(shí)段，隨著補(bǔ)肝散含藥血清濃度的增加，HSC的細(xì)胞膜與[3H]PK11195的結(jié)合量明顯減少，其中，10％含藥血清組和20％含藥血清組效果明顯優(yōu)于5％含藥血清組(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)的第11天(細(xì)胞傳代培養(yǎng)后1天)和第13天(細(xì)胞傳代培養(yǎng)后3天)，20％含藥血清組效果明顯優(yōu)于10％含藥血清組(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)的第15天(細(xì)胞