托吡酯對成年癲癇大鼠海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生影響的研究.pdf

1、目的：近年來研究發(fā)現(xiàn)，成年哺乳動物腦內(nèi)存在神經(jīng)發(fā)生，其中海馬齒狀回顆粒細(xì)胞下層是兩個主要區(qū)域之一。神經(jīng)發(fā)生指神經(jīng)細(xì)胞的再生，包括神經(jīng)前體細(xì)胞增殖、存活、分化及新生神經(jīng)元的遷移等過程。許多損傷因素諸如外傷、缺血缺氧、癲癇等均可導(dǎo)致成年海馬神經(jīng)發(fā)生。本研究利用腹腔注射氯化鋰-匹羅卡品建立成年大鼠SE模型，通過5-溴脫氧尿核苷（BrdU）標(biāo)記新生的神經(jīng)細(xì)胞，利用免疫組織化學(xué)、免疫熒光等方法觀察托吡酯影響癲癇后海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生的情況，利用Fl

2、uoro-Jade B法觀察托吡酯是否對神經(jīng)元有保護(hù)作用，為進(jìn)一步探討新生神經(jīng)元的功能提供依據(jù)。
　　 方法：取購自第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心的32只Sprague-Dawley（SD）成年雄性大鼠，出生8w，體重200-220g。（30mg/kg），當(dāng)大鼠癇性發(fā)作達(dá)Ⅳ級并持續(xù)達(dá)90min時給予腹腔注射苯巴比妥鈉（50mg/kg）終止發(fā)作，解除癇性發(fā)作后狀態(tài)良好的視為合格SE模型。正常大鼠以相同體積的0.9％氯化鈉取代氯化鋰、匹羅

3、卡品和苯巴比妥鈉。隨機(jī)取16只正常及16只SE大鼠分為注射BrdU后1d組及28d組，各組動物再次隨機(jī)做標(biāo)記，分為4小組（正常對照組，SE對照組，正常+托吡酯組， SE+托吡酯組），每小組4只大鼠。在制備SE模型后5h時開始進(jìn)行干預(yù)：正常+托吡酯組和SE+托吡酯組給予溶于蒸餾水的托吡酯（80mg/kg.d，分2次）灌胃，正常對照組和SE對照組給予蒸餾水（與托吡酯同體積）灌胃。于干預(yù)后第6d腹腔注射BrdU標(biāo)記海馬齒狀回新生的神經(jīng)細(xì)胞，分

4、別于注射BrdU后1d、28d對相應(yīng)組別大鼠給以戊巴比妥鈉（50mg/kg）過量麻醉后，取腦，冰凍切片機(jī)切片，每隔5張取一張海馬組織為1組腦片收集于0.01M磷酸鉀鹽緩沖生理鹽水（potassium phosphate-buffered saline，KPBS）中備用。用免疫組織化學(xué)方法通過觀察各組大鼠注射。BrdU后第1d及第28d海馬齒狀回BrdU陽性細(xì)胞的表達(dá)了解新生細(xì)胞的增殖及存活情況；用免疫熒光雙標(biāo)方法通過觀察各組大鼠注射Br

5、dU后第28d BrdU/神經(jīng)元核性蛋白（NeuN）、BrdU/膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）表達(dá)了解新生細(xì)胞分化情況；用免疫組織化學(xué)方法通過觀察各組大鼠注射BrdU后第28ddoublecortin（DCX）陽性細(xì)胞的表達(dá)了解新生神經(jīng)元遷移情況；用Fluoro-Jade B染色法觀察各組大鼠注射BrdU后第28d海馬齒狀回神經(jīng)元的變性。所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析及Tukey組間比較。
　　 結(jié)果：⑴注

6、射BrdU后1d，SE對照組大鼠海馬齒狀回BrdU陽性細(xì)胞數(shù)量與正常對照組比較明顯增加（P<0.01）；SE+托吡酯組大鼠海馬齒狀回BrdU陽性細(xì)胞與SE對照組比較明顯減少（P<0.01）。⑵射BrdU后28d，SE對照組大鼠海馬齒狀回BrdU陽性細(xì)胞數(shù)量與正常對照組比較明顯增加（P<0.01）；SE+托吡酯組大鼠海馬齒狀回BrdU陽性細(xì)胞數(shù)量與SE對照組比較明顯增加（P<0.01）。⑶注射BrdU后28d，SE對照組大鼠海馬齒狀回Br

7、dU/NeuN雙陽性細(xì)胞數(shù)量與正常對照組比較明顯增加（P<0.01）；SE+托吡酯組大鼠海馬齒狀回BrdU/NeuN雙陽性細(xì)胞數(shù)量與SE對照組大鼠比較明顯增加（P<0.01）；但各組BrdU陽性細(xì)胞分化為NeuN陽性細(xì)胞的比例無明顯差異（P>0.05）。⑷注射BrdU后28d，SE對照組大鼠海馬顆粒細(xì)胞層DCX陽性細(xì)胞數(shù)目與正常對照組比較明顯減少（P<0.01），伸向門區(qū)的突起數(shù)目有所增加；SE+托吡酯組大鼠海馬齒狀回DCX陽性細(xì)胞數(shù)目

8、與SE對照組比較無明顯差異（P>0.05），伸向門區(qū)的突起數(shù)目亦無明顯差異。⑸注射BrdU后28d，SE對照組大鼠海馬齒狀回Fluoro-JadeB陽性細(xì)胞數(shù)量與正常對照組比較明顯增加（P<0.01）；SE托吡酯組大鼠海馬齒狀回Fluoro-Jade B陽性細(xì)胞數(shù)量與SE對照組大鼠比較明顯減少（P<0.01）。
　　 結(jié)論：①癲癇可促進(jìn)海馬齒狀回內(nèi)源性神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖，但其對新生細(xì)胞的存活有抑制作用。②癲癇后新生的細(xì)胞大部分分