中國人nm23H1、KAI1基因遺傳不穩(wěn)定性及腫瘤臨床病理特性的相關性研究.pdf

1、研究背景 惡性腫瘤起病隱匿，微小癌灶的浸潤和轉(zhuǎn)移難以及時探查和治療，是患者生存率低的主要原因。為此，闡明腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移的機制，確立可靠的預后指標和治療靶點極為重要。 研究發(fā)現(xiàn)，隨著腫瘤進展和轉(zhuǎn)移的發(fā)生，腫瘤細胞內(nèi)抑癌蛋白的表達量減少，逐漸失去對腫瘤細胞生長、轉(zhuǎn)移的抑制，表現(xiàn)為腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移。而抑癌基因的失活是編碼蛋白量減少的重要機制之一。為揭示抑癌基因失活的機理，國內(nèi)外針對P53、P16等抑癌基因作了大量研究，結(jié)果表明基因的

2、遺傳不穩(wěn)定性改變，即微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatelliteinstablility，MSI)和雜合性缺失(lossofheterozygosity，LOH)，可能是產(chǎn)生基因突變，導致抑癌基因功能失調(diào)，引起腫瘤發(fā)生的重要因素。微衛(wèi)星是由2-6個核苷酸組成，具有高度多態(tài)性的簡單串聯(lián)核苷酸重復序列。MSI是指由于復制錯誤導致微衛(wèi)星的增多或減少。LOH是指一個位點上兩個多態(tài)性的等位基因中的一個出現(xiàn)缺失或變異。大量研究表明，抑癌基因MSI與

3、LOH在腫瘤的多步驟發(fā)生過程中起著重要的作用。MSI首先是在遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌(hereditynon-polyposiscolorectalcancer，HNPCC)中發(fā)現(xiàn)的，后在各種散發(fā)性腫瘤如大腸癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、前列腺癌和胰腺癌中均發(fā)現(xiàn)MSI。研究表明MSI的發(fā)生提高了隨機突變率，更重要的是導致了腫瘤相關基因的突變，可能是引起腫瘤發(fā)生的一個重要機制。若DNA復制錯誤的結(jié)果是等位基因片段的缺失，則導致LOH的發(fā)生。

4、研究發(fā)現(xiàn)與抑癌基因相關的雜合性微衛(wèi)星位點常伴有等位基因的丟失，即LOH的發(fā)生。所以分析LOH已成為目前檢測抑癌基因失活、發(fā)現(xiàn)和定位新的腫瘤抑制基因的重要手段之一。 nm23H1基因定位于17號染色體長臂(17q21)，是一種重要的抑癌基因。Steeg等在對鼠黑色素瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，nm23H1基因的特異性表達產(chǎn)物nm23H1蛋白/核苷二磷酸激酶(NDPK)能有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，逐將nm23H1冠以“腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因”，并對其抗腫瘤轉(zhuǎn)

5、移機理進行了大量研究。但多集中于nm23H1蛋白/核苷二磷酸激酶(NDPK)表達的免疫組織化學研究，而有關腫瘤轉(zhuǎn)移時nm23H1基因的遺傳學研究，國內(nèi)外均較少。KAI基因是近年發(fā)現(xiàn)的一個新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，Dong等首先從前列腺癌細胞系中分離鑒定，能抑制鼠前列腺癌細胞肺轉(zhuǎn)移但不影響其致瘤能力。有研究證明，在多種癌組織和細胞系中檢測到KAI1在分子水平上的表達，然而它在胃癌中的表達情況，國內(nèi)外報道較少，且結(jié)論尚有爭議。胃癌KAI1基因的

6、遺傳不穩(wěn)定性研究尚鮮見報道。 研究目的 研究D17S396位點、D11S1344、D11S1326位點微衛(wèi)星不穩(wěn)定(microsatelliteinstablility,MSI)和雜合性缺失(lossofheterozygosity,LOH)，對腫瘤nm23H1蛋白、KAI1蛋白表達的影響，闡明nm23H1基因、KAI1基因遺傳不穩(wěn)定性與腫瘤進展的關系，為揭示抑癌基因作用機制和腫瘤轉(zhuǎn)移機制提供實驗依據(jù)。 研究方法 (

7、1)石蠟包埋組織抽提DNA。(2)PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)，常規(guī)銀染顯示條帶。(3)Envision免疫組織化學檢測，(4)Leica-Qwin計算機圖像分析技術。(5)SPSS軟件統(tǒng)計分析。 研究結(jié)果 (1)卵巢上皮性腫瘤nm23H1基因遺傳不穩(wěn)定性及腫瘤臨床病理特性的相關性研究：①卵巢上皮性癌D17S396位點遺傳不穩(wěn)定發(fā)生率為40％，明顯高于交界性腫瘤的9.52％，而在良性腫瘤和正常卵巢組織中，未見該位點遺傳不

8、穩(wěn)定的發(fā)生。其中，LOH的發(fā)生率，隨組織惡性程度的增高而增加(P＜0.05)。在卵巢上皮性癌中，LOH發(fā)生率在淋巴轉(zhuǎn)移組高于無淋巴轉(zhuǎn)移組，F(xiàn)IGOⅢ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期(P＜0.05)。②nm23H1蛋白陽性率在卵巢上皮性癌和交界性腫瘤組織中分別為56.00％和57.14％，高于良性腫瘤(13.64％，P＜0.01)和正常卵巢組織的(8.33％，P＜0.01)。卵巢上皮性癌中，淋巴轉(zhuǎn)移組nm23H1蛋白陽性率低于無淋巴轉(zhuǎn)移組；FIGOⅢ+

9、Ⅳ期nm23H1蛋白陽性率低于Ⅰ+Ⅱ期(P＜0.05)。③在卵巢上皮性癌中，LOH陽性組中nm23H1蛋白陽性率(0.00％)顯著低于LOH陰性組(73.68％，P＜0.01)。 (2)胃癌KAI1基因遺傳不穩(wěn)定性及腫瘤臨床病理特性的相關性研究：①胃癌KAI1蛋白陽性檢出率為55.4％。②隨著癌組織浸潤程度的進展，其陽性率呈降低趨勢(P＜0.01)；KAI1蛋白表達率在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(83.9％)顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(20.0％

10、，P＜0.01)；在TNMⅠ+Ⅱ期(82.8％)明顯高于TNMⅢ+Ⅳ期(25.9％，P＜0.01)。③56例胃癌D11S1326，D11S1344位點的SSCP分析中，均未出現(xiàn)MSI或LOH。 結(jié)論 nm23H1基因的遺傳不穩(wěn)定性可能是卵巢上皮性癌發(fā)生發(fā)展的一個機制。nm23H1基因LOH的發(fā)生可作為卵巢組織惡變的判斷指標。nm23H1基因的MSI和LOH通過相互獨立的途徑調(diào)控卵巢上皮癌的發(fā)生、進展，后者可抑制卵巢上皮癌局部n