水稻籽粒24nt-siRNA對(duì)miRNA及籽粒表型的影響.pdf

1、24nt-siRNA是植物體中最為豐富的小RNA，水稻籽粒24nt-siRNA的表達(dá)發(fā)生變化后對(duì)miRNA的表達(dá)是否有影響仍不明確。本實(shí)驗(yàn)利用24nt-siRNA產(chǎn)生途徑中3個(gè)關(guān)鍵酶基因（DCL3a、POLⅣ、RDR2）的胚乳特異性水稻轉(zhuǎn)基因干擾株系，通過(guò)大規(guī)模小RNA測(cè)序檢測(cè)siRNA和miRNA的表達(dá)量變化，預(yù)測(cè)差異miRNA的靶基因功能，分析籽粒24nt-siRNA表達(dá)量減少后對(duì)miRNA表達(dá)的影響，為研究24nt-siRNA影響

2、miRNA表達(dá)的作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下：
　　1、利用Q-PCR定量檢測(cè)水稻花后9天的籽粒中目的基因的表達(dá)，結(jié)果表明，RNAi株系中三個(gè)目的基因DCL3a、POLⅣ、RDR2的表達(dá)量顯著減少。
　　2、利用高通量測(cè)序技術(shù)，對(duì)目的基因沉默顯著株系的籽粒小RNA進(jìn)行測(cè)序。3個(gè)Os DCL3a、OsPOLⅣ、OsRDR2轉(zhuǎn)基因干擾株系中，24nt-siRNA表達(dá)量減少。與野生型日本晴相比，DCL3ai-6中表達(dá)量顯著增加的

3、miRNA占54.24％（32/59），POLⅣi-11中占54.84%（17/31），RDR2i-23-1中占12.20%（5/41）；進(jìn)一步借助psRNATarget數(shù)據(jù)庫(kù)分析鑒定了190個(gè)差異miRNA的靶基因，利用AgriGO進(jìn)行功能注釋，其靶基因在reproduction、developmental process和reproductive process等生物學(xué)過(guò)程中得到顯著富集，說(shuō)明差異miRNA可能在調(diào)節(jié)水稻籽粒發(fā)育中具

4、有重要的作用。
　　3、對(duì)osa-miR156l-5p、osa-miR167e-3p和osa-miR1861d在OsDCL3a、OsPOLⅣ、OsRDR2轉(zhuǎn)基因干擾株系中表現(xiàn)趨勢(shì)相同的miRNA及其前體進(jìn)行表達(dá)量檢測(cè)。結(jié)果表明，Pre-miRNA和miRNA的變化情況一致，說(shuō)明24nt-siRNA表達(dá)減少以后對(duì)miRNA表達(dá)的影響發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上，而不是發(fā)生在miRNA轉(zhuǎn)錄后加工水平上。
　　4、分析水稻植株性狀和籽粒性狀，