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文檔簡(jiǎn)介
1、24nt-siRNA是植物體中最為豐富的小RNA,水稻籽粒24nt-siRNA的表達(dá)發(fā)生變化后對(duì)miRNA的表達(dá)是否有影響仍不明確。本實(shí)驗(yàn)利用24nt-siRNA產(chǎn)生途徑中3個(gè)關(guān)鍵酶基因(DCL3a、POLⅣ、RDR2)的胚乳特異性水稻轉(zhuǎn)基因干擾株系,通過(guò)大規(guī)模小RNA測(cè)序檢測(cè)siRNA和miRNA的表達(dá)量變化,預(yù)測(cè)差異miRNA的靶基因功能,分析籽粒24nt-siRNA表達(dá)量減少后對(duì)miRNA表達(dá)的影響,為研究24nt-siRNA影響
2、miRNA表達(dá)的作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:
1、利用Q-PCR定量檢測(cè)水稻花后9天的籽粒中目的基因的表達(dá),結(jié)果表明,RNAi株系中三個(gè)目的基因DCL3a、POLⅣ、RDR2的表達(dá)量顯著減少。
2、利用高通量測(cè)序技術(shù),對(duì)目的基因沉默顯著株系的籽粒小RNA進(jìn)行測(cè)序。3個(gè)Os DCL3a、OsPOLⅣ、OsRDR2轉(zhuǎn)基因干擾株系中,24nt-siRNA表達(dá)量減少。與野生型日本晴相比,DCL3ai-6中表達(dá)量顯著增加的
3、miRNA占54.24%(32/59),POLⅣi-11中占54.84%(17/31),RDR2i-23-1中占12.20%(5/41);進(jìn)一步借助psRNATarget數(shù)據(jù)庫(kù)分析鑒定了190個(gè)差異miRNA的靶基因,利用AgriGO進(jìn)行功能注釋,其靶基因在reproduction、developmental process和reproductive process等生物學(xué)過(guò)程中得到顯著富集,說(shuō)明差異miRNA可能在調(diào)節(jié)水稻籽粒發(fā)育中具
4、有重要的作用。
3、對(duì)osa-miR156l-5p、osa-miR167e-3p和osa-miR1861d在OsDCL3a、OsPOLⅣ、OsRDR2轉(zhuǎn)基因干擾株系中表現(xiàn)趨勢(shì)相同的miRNA及其前體進(jìn)行表達(dá)量檢測(cè)。結(jié)果表明,Pre-miRNA和miRNA的變化情況一致,說(shuō)明24nt-siRNA表達(dá)減少以后對(duì)miRNA表達(dá)的影響發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上,而不是發(fā)生在miRNA轉(zhuǎn)錄后加工水平上。
4、分析水稻植株性狀和籽粒性狀,
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