亮氨酸對(duì)豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖及氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)的影響.pdf

1、為了研究亮氨酸（Leu）通過(guò)mTOR信號(hào)通路對(duì)豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖以及氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體表達(dá)的影響。本試驗(yàn)分別利用MTT法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同Leu濃度（0、0.1、0.5、1、5、10 mM）處理pTr細(xì)胞不同時(shí)間（24 h、48 h、72 h）后，對(duì)其增殖活力和細(xì)胞周期分布的影響。并利用熒光定量PCR檢測(cè)不同Leu濃度（0、1、10 mM）處理pTr細(xì)胞不同時(shí)間（24 h、48h）后，氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體、mTOR信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白、細(xì)胞周期蛋

2、白依賴型激酶CDK4以及凋亡基因Caspase-8 mRNA表達(dá)水平的變化。
　　試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1、不同濃度Leu處理pTr細(xì)胞24 h后，0.5mM、1mM組和10mM組顯著提高細(xì)胞增殖數(shù)目；Leu處理pTr細(xì)胞48 h后，所有試驗(yàn)組均極顯著的降低細(xì)胞數(shù)目；Leu處理pTr細(xì)胞72h后，1 mM和10 mM亮氨酸試驗(yàn)組極顯著降低pTr細(xì)胞增殖數(shù)目。
　　2、不同濃度Leu處理pTr細(xì)胞24 h和48 h后，各試

3、驗(yàn)組G0-G1期細(xì)胞數(shù)目逐漸增多，S期細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，并呈時(shí)間和劑量依賴性。RT-PCR試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著Leu濃度的增加，CDK4的mRNA相對(duì)表達(dá)量逐漸降低，且10mM Leu處理pTr細(xì)胞48 h后，差異顯著。
　　3、不同濃度Leu處理pTr細(xì)胞24 h和48 h后，細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Caspase-8的mRNA相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組相比差異均不顯著。
　　4、不同濃度Leu處理pTr細(xì)胞，1 mMLeu試驗(yàn)組處理pTr

4、細(xì)胞24 h后顯著降低4E-BP1的mRNA相對(duì)表達(dá)量（P<0.05），但10 mM試驗(yàn)組與對(duì)照組差異不顯著；1 mM和10 mMLeu試驗(yàn)組處理pTr細(xì)胞48 h后極顯著降低4E-BP1的mRNA相對(duì)表達(dá)量。1mMLeu試驗(yàn)組處理pTr細(xì)胞24 h后顯著降低eIF4G的mRNA相對(duì)表達(dá)量，但處理48h后差異不顯著。10 mMLeu試驗(yàn)組處理pTr細(xì)胞24 h后，mTOR的mRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著地高于對(duì)照組和1 mM試驗(yàn)組，48 h后

5、，差異顯著。不同濃度Leu處理pTr細(xì)胞24 h和48 h后，S6K1、PKB的mRNA相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組相比，差異均不顯著。
　　5、不同濃度Leu處理pTr細(xì)胞后，所有試驗(yàn)組的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體SNAT1、SNAT2、LAT1、4F2hc、rBAT的mRNA相對(duì)表達(dá)量相比于對(duì)照組均呈現(xiàn)不同程度的降低。其中處理24h后，除1mM Leu試驗(yàn)組處理pTr細(xì)胞相比于對(duì)照組極顯著地降低SNAT1的mRNA相對(duì)表達(dá)量，且顯著地低于10 mM

6、Leu試驗(yàn)組外，所有試驗(yàn)組的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體SNAT2、LAT1、4F2hc、rBAT的mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于對(duì)照組，但差異均不顯著。處理48 h后，1mM亮氨酸試驗(yàn)組顯著降低氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體 LAT1的mRNA相對(duì)表達(dá)量，但對(duì)SNAT1、SNAT2、4F2hc、rBAT的mRNA相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著影響。10 mM亮氨酸試驗(yàn)組極顯著降低氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體SNAT1、SNAT2、LAT1的mRNA相對(duì)表達(dá)量,顯著降低氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體rBAT的mRN