雷公藤甲素對變應(yīng)性鼻炎大鼠iNOS和Eotaxin及NF-κB影響的研究.pdf

1、背景和目的 變應(yīng)性鼻炎(Allergic rhinitis，AR)是發(fā)生在鼻粘膜的變態(tài)反應(yīng)性疾病，鼻粘膜的高反應(yīng)性和高分泌性是其主要特點，以鼻癢、噴嚏、鼻漏、鼻塞為主要癥狀。廣泛的炎癥介質(zhì)包括趨化因子(Chemokine)、酶等在鼻粘膜中的高表達(dá)是變應(yīng)性鼻炎顯著的病理特征，更是其發(fā)病機制中的重要環(huán)節(jié)。但是，這些炎癥介質(zhì)在變應(yīng)性鼻炎鼻粘膜中高表達(dá)的分子機制并不十分清楚。近年來研究表明，這些炎癥介質(zhì)的高表達(dá)是受某些轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的。其

2、中，核因子．-<,к>B(Nuclear factor-<,к>B,NF-<,к>B)在慢性炎癥性疾病中對許多炎癥介質(zhì)具有直接調(diào)控作用。雷公藤甲素(Triptolide,TP)具有廣泛的免疫抑制作用，其突出特點是它有激素樣作用而無激素樣副作用，已成功應(yīng)用于支氣管哮喘的臨床治療。本實驗擬通過AR大鼠模型觀察NF-<,к>B與Eotaxin及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)之問的

3、關(guān)系以及TP對NF-<,к>3、Eotaxin和iNOS的作用，從而探討TP治療AR的可能機制；同時與激素類藥物作比較，為TP在AR臨床治療的應(yīng)用前景提供實驗依據(jù)。 材料與方法 48只健康SD大鼠隨機分成四組：卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏組，雷公藤甲素(Triptolide,TP)處理組，地塞米松(Dexamethasone,DM)處理組和生理鹽水(Sodium chloride,SC)組，參照安云芳造模

4、方法并予改良，用卵清蛋白按照基礎(chǔ)致敏和激發(fā)兩個階段建立AR大鼠模型，TP處理組、DM處理組和SC組分別用TP、DM和SC在激發(fā)前30分鐘腹腔注射和鼻腔滴入。模型成功后，10﹪水合氯醛腹腔內(nèi)注射麻醉，心臟放血法處死大鼠，取各組大鼠鼻粘膜組織，4﹪多聚甲醛固定，石蠟包埋，制成4-6μm切片，用多聚賴氨酸處理玻片，粘鋪切片。對各組鼻粘膜組織切片分別行HE染色和甲苯胺藍(lán)染色以進(jìn)行病理觀察；用免疫組化技術(shù)觀察鼻粘膜組織iNOS、Eotaxin以及

5、NF-κB的表達(dá)情況，光鏡下任選5個視野，計算機圖象分析陽性區(qū)的灰度值，計算其平均值作為該片的代表值。實驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件包SPSS11.0，統(tǒng)計學(xué)分析采用單因素方差分析并繼以最小顯著差(LSD)t檢驗比較組間差異，相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析法。 結(jié)果 (1)動物行為觀察：OVA致敏組大鼠煩躁不安、鼻癢、噴嚏、流涕癥狀明顯：TP處理組和DM處理組少量模型動物有輕微癥狀，神智安靜；SC組動物未見上述癥狀。 (2)鼻

6、粘膜HE染色鏡下觀察：OVA致敏組大鼠鼻粘膜腫脹增厚，腺腔及小血管管腔擴(kuò)張，杯狀細(xì)胞增多。在粘膜及粘膜下層，小血管及腺體周圍，有大量炎性細(xì)胞浸潤；TP處理組和DM處理組炎癥表現(xiàn)較輕；SC組無明顯炎癥表現(xiàn)。EOS計數(shù)：OVA致敏組：9.104±0.76；TP處理組：3.934±0.51；DM處理組：4.014±0.59；SC組：0.524±0.43；OVA致敏組鼻粘膜嗜酸性粒細(xì)胞細(xì)胞數(shù)較SC組顯著升高(P<0.01)。TP和DM組可顯著降

7、低致敏大鼠鼻粘膜嗜酸性粒細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)(P<0.01)。 (3)鼻粘膜甲苯胺藍(lán)染色鏡下觀察：OVA致敏組大鼠鼻粘膜腫脹增厚，腺腔及小血管擴(kuò)張，在粘膜及粘膜下層可見肥大細(xì)胞沿血管壁廣泛浸潤。TP處理組和DM處理組病理改變較OVA組減輕；SC組僅見少量肥大細(xì)胞沿著小血管壁散在分布。肥大細(xì)胞計數(shù)：OVA致敏組：22.71±1.20；TP處理組：11.28±1.36；DM處理組：10.73±0.81；SC組：1.354±0.76；OVA致

8、敏組鼻粘膜肥大細(xì)胞細(xì)胞數(shù)較SC組顯著升高(P<0.01)。TP和DM組可顯著降低致敏大鼠鼻粘膜肥大細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)(P<0.01)。 (4)免疫組化檢測結(jié)果：①鼻粘膜組織中iNOS的檢測結(jié)果：iNOS主要表達(dá)于上皮、腺體、血管內(nèi)皮、平滑肌和炎性細(xì)胞中，胞漿著色，呈棕黃色。鼻粘膜組織中iNOS陽性區(qū)的灰度值為：OVA致敏組：92.41±12.23；TP處理組： 53.54±5.60；DM處理組：59.32±9.50；SC組：3

9、7.54±6.02。②鼻粘膜組織中Eotaxin的檢測結(jié)果：Eotaxin主要表達(dá)于上皮細(xì)胞、腺體細(xì)胞和一些炎性細(xì)胞中，胞漿著色，呈棕黃色。鼻粘膜組織中Eotaxin陽性區(qū)的灰度值為：OVA致敏組：98.23±11.23：TP處理組：55.21±8.26；DM處理組：58.73±10.65；SC組：38.36±5.89。③鼻粘膜組織中NF-кB的檢測結(jié)果：NF-кB主要表達(dá)于鼻粘膜組織上皮細(xì)胞、腺體細(xì)胞和血管周圍的炎性細(xì)胞，胞漿、胞核均

10、著色，呈棕黃色。鼻粘膜組織中NF-кB陽性區(qū)的灰度值為：OVA致敏組：97.10±11.16；TP處理組：60.08±6.47；DM處理組：64.48±10.13；SC組：38.75±7.47。iNOS、Eotaxin和NF-кB中，OVA致敏組或SC組與其它三組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；TP處理組和DM處理組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 (5)相關(guān)性分析：OVA致敏組大鼠鼻粘膜組織中iNOS的表達(dá)強度與Eot

11、axin的表達(dá)強度呈強烈正相關(guān)(r=0.886,P<0.01)；OVA致敏組大鼠鼻粘膜組織中NF-кB的表達(dá)強度與iNOS、Eotaxin的表達(dá)強度呈強烈正相關(guān)(r=0.818，r=0.908，P<0.01)。 結(jié)論 (1)TP對OVA致敏的變應(yīng)性鼻炎大鼠模型癥狀有明顯的控制效果。 (2)TP可顯著降低變應(yīng)性鼻炎大鼠模型鼻粘膜嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞的浸潤。 (3)TP 可顯著抑制變應(yīng)性鼻炎大鼠模型鼻粘膜