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1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文RNA干擾iNOS基因?qū)ι圜[癌細(xì)胞增殖活性及VEGF表達(dá)抑制的實驗研究姓名:楊嵐申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:陳偉良20060418中山大學(xué)邶i - I :論文 R N A 干擾i N O S 基因?qū)ι圜[瑞細(xì)胞增殖活性及V E G F 表達(dá)抑制的實驗研究新生血管,刁請E 維持其繼續(xù)生長。腫瘤血管生成受血管生成促進(jìn)因子和血管生成抑制因子的共同凋控。腫瘤的血管形成則表明二者之間的平衡狀態(tài)被打破。血管內(nèi)皮生
2、長因子( v a s c u l a r e n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r ,V E G F ) 是腫瘤新生血管形成最重要的細(xì)胞因子,通過一系列作用促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。近期的研究發(fā)現(xiàn):N O 也是促進(jìn)腫瘤血管形成的細(xì)胞因子,并與V E G F 相互作用,共l 司促進(jìn)腫瘤血管的生成。許多研究都表明,i N O S 和V E G F 與腫瘤血管生成密切相關(guān)。R N A 干擾( R N A i
3、 n t e r f e r e n c e ,R N A i ) 是一種由雙鏈R N A ( d o u b l e .s t r a n d e dR N A ,d s R N A ) 抑制細(xì)胞內(nèi)源性基因表達(dá)的現(xiàn)象。它是動植物生物體內(nèi)普遍存在的一種現(xiàn)象,是生物體在進(jìn)化上的種保守的基因組水平的免疫監(jiān)控機制。自從1 9 9 8年F i r e 在對線蟲的研究中偶然發(fā)現(xiàn)R N A i 這一現(xiàn)象以來,R N A 干擾技術(shù)做為一種新的分子醫(yī)學(xué)
4、研究的手段,由于其高穩(wěn)定性、高效率性、高特異性、可遺傳性和合成簡便等特性,很快就成為眾多學(xué)者進(jìn)行反向遺傳學(xué)研究的一種行之有效的分子生物學(xué)工具之一。在本課題的研究中,我們采用了R N A 干擾技術(shù),通過質(zhì)粒表達(dá)載體的形式,將i N O S 基岡的特異性短發(fā)夾狀R N A f s h o r th a i r p i nR N A ,s h R N A ) ) ;- 斷轉(zhuǎn)染入舌鱗癌T c a 8 1 1 3 絀胞中。流式細(xì)胞儀和M T T
5、法分別檢測T e a 8 1 1 3 細(xì)胞的凋亡和增殖活性的變化情況;通過R T - P C R 和W e s t e r n —b l o t t i n g 等實驗檢測技術(shù),分別從m R N A 水平和蛋白表達(dá)水平檢測i N O S 和V E G F 基因的表達(dá)改變情況。以進(jìn)一步探討i N O S 基兇是否存在對T c a 8 1 1 3 細(xì)胞中V E G F 基岡的表達(dá)調(diào)控。本研究分兩個部分進(jìn)行:第一部分:R N A 干擾i N
6、O S 基因?qū)ι圜[癌細(xì)胞增殖活性影響的實驗研究為研究N O 和i N O S 對腫瘤細(xì)胞凋亡和增殖活性的影響,本實驗用脂質(zhì)體L I P O F E C T A M r N E2 0 0 0 介導(dǎo),將由武漢晶賽公司設(shè)計并合成的含有i N O S 特異性s h R N A 的p G e n e s i l .1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入舌鱗癌T e a l 1 3 細(xì)胞株,同時設(shè)陰性對照和空白對照。流式細(xì)胞儀和M T T 法分別檢測T c a l l 3
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