針刺對(duì)大鼠高眼壓狀態(tài)下視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用.pdf

1、青光眼是我國(guó)主要的致盲眼病之一，以視神經(jīng)損害為其主要特征。其發(fā)病機(jī)制通?？梢詺w納為兩大類：機(jī)械學(xué)說(shuō)及血流學(xué)說(shuō)，但均不完整。近年來(lái)，隨著生物學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)，青光眼中一部分視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞可以通過(guò)細(xì)胞凋亡這一機(jī)制而死亡，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡常導(dǎo)致視功能發(fā)生不可逆性損害。 長(zhǎng)期以來(lái)，降低眼壓一直是針灸治療的主要目的。近年來(lái)的研究表明，針灸治療除了能降低眼壓外，還能通過(guò)針刺使Bcl-2抑制凋亡基因表達(dá)增多，Ba

2、x促進(jìn)凋亡基因表達(dá)減少及Bcl-2/Bax的比值升高；減少高眼壓模型大鼠視網(wǎng)膜一氧化氮(NO)含量，或阻止其過(guò)量生成，從而維持或改善視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)生存微環(huán)境等來(lái)影響神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡，因此通過(guò)針刺在一定程度保護(hù)高眼壓下的視神經(jīng)。 目的：探討針刺對(duì)持續(xù)性高眼壓下大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行初步探討，明確針刺在青光眼視神經(jīng)保護(hù)方面的作用，為針刺治療青光眼提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1

3、. 研究對(duì)象 正常對(duì)照組：SD大鼠12只模型對(duì)照組：SD大鼠12只針刺治療組：SD大鼠12只2 造模方法：采用Akria法，烙閉大鼠雙眼3支上鞏膜靜脈。制作大鼠持續(xù)性高眼壓模型。 3. 術(shù)后一、二、三天用筆式眼壓計(jì)TONO-PEN測(cè)量大鼠眼壓。 4. 造模后一周給予針刺治療組針刺睛明、太沖穴進(jìn)行治療一個(gè)月，同時(shí)每周測(cè)眼壓一次。 5. 取視網(wǎng)膜進(jìn)行視網(wǎng)膜光鏡形態(tài)學(xué)觀察、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層厚度測(cè)量；免疫組化染色法觀

4、察RGCs凋亡基因陽(yáng)性率；采用硝酸還原酶法測(cè)定視網(wǎng)膜NO的含量。 6 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。多組間比較用單因素方差分析，組間兩兩比較，自身前后對(duì)照比較用配對(duì)t檢驗(yàn)，各項(xiàng)指標(biāo)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示。 結(jié)果： 1. 模型眼及對(duì)照眼各16只，大鼠雙眼造模前三天模型眼眼壓為12.48±1.04mmHg，對(duì)照眼眼壓為12.53±1.15 mmHg，所有大鼠雙眼眼壓

5、經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，具有可比性；造模后三天，模型眼眼壓為19.96±2.11mmHg，與造模前及對(duì)照眼比較均有顯著性差異(P<0.01)；造模后一月模型眼眼壓為18.88±2.66mmHg，對(duì)照眼眼壓為12.6±1.57mmHg，造模后一月模型眼眼壓有所下降，但與對(duì)照眼、造模前比較均有顯著性差異(P<0.01=。 2. 正常眼、模型眼及對(duì)照眼各16只，造模前正常對(duì)照組眼壓為12.04±1.10mmHg，模

6、型對(duì)照組眼壓為12.56±1.05mmHg，針刺治療組眼壓為13.08±1.06mmHg，各組大鼠眼壓經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)顯著性差異(P>0.05)；造模后針刺前，正常對(duì)照組眼壓為11.90±1.19mmHg，模型對(duì)照組眼壓為20.15±2.56mmHg，針刺治療組眼壓為19.81±1.72mmHg，模型對(duì)照組及針刺治療組眼壓與正常對(duì)照組及造模前比較有顯著性差異(P<0.05)；針刺一個(gè)月時(shí)，正常對(duì)照組眼壓為13.88±0.90mmHg，模型

7、對(duì)照組眼壓為19.94±2.95mmHg，針刺治療組眼壓為16.65±1.81mmHg，針刺治療組與造模后針刺前有顯著性差異(P<0.01)；針刺一個(gè)月時(shí)，針刺治療組及正常對(duì)照組眼壓與模型對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05)。 3. 正常眼、模型眼及對(duì)照眼各8只，正常對(duì)照組RGCs厚度為264.51±40.53um，模型對(duì)照組RGCs厚度為179.07±62.70um，針刺治療組RGCs厚度為207.22±43.51um，模型

8、對(duì)照組與針刺治療組RGCs厚度與正常對(duì)照組比較，均明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；針刺治療組與模型對(duì)照組相比，RGCs厚度增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 4. 正常眼、模型眼及對(duì)照眼各8只，正常眼、模型眼及對(duì)照眼Bcl-2陽(yáng)性率分別為1.49±0.31％、0.33±0.47％、0.75±0.96％，模型對(duì)照組與針刺治療組的Bcl-2陽(yáng)性率均明顯低于正常對(duì)照組，具有顯著性差異(P<0.05～0.01

9、)；與模型對(duì)照組比較，針刺治療組Bcl-2表達(dá)陽(yáng)性率較強(qiáng)，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義(P<0.05)。 5. 正常眼、模型眼及對(duì)照眼各8只，正常眼、模型眼及對(duì)照眼Bax陽(yáng)性率分別為1.62±0.91％、4.14±1.31％、2.92±1.19％，模型對(duì)照組與針刺治療組的Bax陽(yáng)性率均明顯高于正常對(duì)照組，具有顯著性差異(P<0.05～0.01)；與模型對(duì)照組比較，針刺治療組Bax表達(dá)陽(yáng)性率較弱，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義(P<0.05)。

10、 6. 正常眼、模型眼及對(duì)照眼各8只，正常眼、模型眼及對(duì)照眼Bcl-2/Bax比值分別為1.54±0.76、0.54±0.46、1.08±0.84，模型對(duì)照組與針刺治療組的Bcl-2/Bax比值均明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型對(duì)照組比較，針刺治療組表達(dá)的陽(yáng)性率較強(qiáng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 7.正常眼、模型眼及對(duì)照眼各7只，正常眼、模型眼及對(duì)照眼NO含量分別為42.42±1.36mol/

11、g、59.41±5.36 mol/g、51.40±2.03 mol/g，模型對(duì)照組與針刺治療組的視網(wǎng)膜NO含量與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.01)；針刺治療組大鼠視網(wǎng)膜NO含量與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：Akria性高眼壓大鼠在高眼壓持續(xù)1個(gè)月后，表現(xiàn)出視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞免疫組織化學(xué)的病理改變。針刺能夠防止或減輕視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡，從而阻止或減輕高眼壓下的視神經(jīng)損傷，其作用機(jī)