鱔魚(yú)、泥鰍顎口線蟲(chóng)感染調(diào)查及分類(lèi)鑒定與LAMP方法的建立.pdf

1、顎口線蟲(chóng)(Gnathostoma)是食源性人畜共患性寄生蟲(chóng)，人食入生的或未熟的感染顎口線蟲(chóng)的淡水魚(yú)，可引起人的顎口線蟲(chóng)病（gnathostomiasis）。顎口線蟲(chóng)病可引起人的移行性皮下包塊，還可侵襲深部組織和器官，如肺、眼、肝、腎、神經(jīng)系統(tǒng)等，引起嚴(yán)重癥狀，甚至可導(dǎo)致死亡。此病是一種新興的疾病，患病人數(shù)日益增加，在某些國(guó)家和地區(qū)還發(fā)生過(guò)暴發(fā)流行的情況，隨著人口流動(dòng)、文化以及國(guó)際貿(mào)易全球化，顎口線蟲(chóng)病呈現(xiàn)全球化的趨勢(shì)，已有非流行地區(qū)的游

2、客在流行地區(qū)感染顎口線蟲(chóng)病，或者消費(fèi)進(jìn)口的民族風(fēng)味食品而感染顎口線蟲(chóng)病的報(bào)道。而且，顎口線蟲(chóng)病在很多國(guó)家和地區(qū)的感染情況是被低估的。目前，此病還沒(méi)有根治的方法，很多病例只能得到緩解，所以日益受到醫(yī)學(xué)上的重視，聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）已將其列為重要的致病因子。本文從進(jìn)口黃鱔中顎口線蟲(chóng)的檢疫入手，進(jìn)行了顎口線蟲(chóng)病的流行病學(xué)調(diào)查，建立了顎口線蟲(chóng)的PCR鑒定方法，同時(shí)建立了顎口線蟲(chóng)LAMP檢測(cè)方法，為顎口線蟲(chóng)的鑒定提供了有效方法，并對(duì)顎口線蟲(chóng)病

3、病原的的診斷、預(yù)防和控制提供了有力的技術(shù)支持。
　　1.顎口線蟲(chóng)的流行病學(xué)調(diào)查
　　對(duì)2015年9月-12月入境的19批次黃鱔進(jìn)行調(diào)查，共檢出11批顎口線蟲(chóng)陽(yáng)性，批次陽(yáng)性率為57.9％。對(duì)廣州市場(chǎng)上的養(yǎng)殖黃鱔、泥鰍進(jìn)行調(diào)查，未檢出陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)廣州白云區(qū)部分池塘內(nèi)的野生黃鱔進(jìn)行調(diào)查，未檢出陽(yáng)性結(jié)果；對(duì)四川、重慶、湖北、黑龍江的黃鱔和泥鰍進(jìn)行調(diào)查，也未發(fā)現(xiàn)顎口線蟲(chóng)；對(duì)福建的黃鱔和泥鰍進(jìn)行調(diào)查，在黃鱔中發(fā)現(xiàn)顎口線蟲(chóng)，說(shuō)明了國(guó)內(nèi)顎口

4、線蟲(chóng)的存在。
　　2.蟲(chóng)種鑒定
　　從形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)角度，對(duì)入境黃鱔中的部分批次的顎口線蟲(chóng)進(jìn)行鑒定，利用Genebank上的顎口線蟲(chóng)COX1序列設(shè)計(jì)特異性引物，對(duì)蟲(chóng)體DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，連接到T克隆載體上送英濰捷基公司測(cè)序，將測(cè)序結(jié)果與Genebank上的顎口線蟲(chóng)COX1序列進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果為：鑒定的顎口線蟲(chóng)全部為棘顎口線蟲(chóng)。此方法適用于一般實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)。
　　3.顎口線蟲(chóng)LAMP檢測(cè)方法的建立
　　根據(jù)顎

5、口線蟲(chóng)28S序列的保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性LAMP引物，并設(shè)計(jì)LB、LF兩個(gè)環(huán)引物，加速反應(yīng)，對(duì)顎口線蟲(chóng)進(jìn)行擴(kuò)增，并進(jìn)行了特異性、靈敏度、重復(fù)性和穩(wěn)定性測(cè)試。用特異性引物對(duì)棘口吸蟲(chóng)、迭宮絳蟲(chóng)、異尖線蟲(chóng)、泡狀帶絳蟲(chóng)、胃瘤線蟲(chóng)、宮脂線蟲(chóng)DNA模板進(jìn)行擴(kuò)增，均未擴(kuò)增，表明該引物有良好的特異性；將目標(biāo)基因克隆到T載體質(zhì)粒上，用大腸桿菌對(duì)質(zhì)粒繁殖后，提取質(zhì)粒，將質(zhì)粒10倍稀釋后進(jìn)行測(cè)試，其檢測(cè)限為1 fg/μL；對(duì)1 fg/μL濃度的質(zhì)粒進(jìn)行15次重復(fù)試