hnRNPA1及TFF3對(duì)胃癌細(xì)胞株BGC-823細(xì)胞生物學(xué)功能作用的研究.pdf

1、胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，腫瘤的形成以及惡變，是一個(gè)涉及多種癌基因和抑癌基因參與作用的復(fù)雜病理過(guò)程。TFF3是三葉因子家族成員之一，是一種小分子粘膜分泌蛋白，其與胃癌的關(guān)系以及在粘膜上皮細(xì)胞中的重建作用已經(jīng)成為大家關(guān)心和研究的熱點(diǎn)之一。hnRNPA1在RNA調(diào)節(jié)中的作用及其在細(xì)胞凋亡和增殖等腫瘤發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中的作用，表明其與腫瘤的形成和發(fā)展息息相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)首次在胃癌細(xì)胞系BGC823中探討TFF3與hnRNPA1腫瘤細(xì)胞生物學(xué)功能

2、的影響，并進(jìn)行二者結(jié)合性的初步探討。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建Myc-hnRNPA1及Flag-TFF3的質(zhì)粒，利用免疫熒光和免疫熒光共聚焦技術(shù)探索二者在HEK-293T細(xì)胞中的共定位。其次構(gòu)建hnRNPA1和TFF3的干擾質(zhì)粒，并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染BGC-823細(xì)胞，并應(yīng)用Western blot檢驗(yàn)干擾hnRNPA1的蛋白表達(dá)情況和應(yīng)用PCR檢測(cè)TFF3的mRNA干擾表達(dá)情況；并進(jìn)一步應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)、CCK-8、Transwell小室實(shí)驗(yàn)及

3、流式技術(shù)分析hnRNPA1及TFF3穩(wěn)轉(zhuǎn)干擾細(xì)胞株的遷移、增殖、侵襲能力及凋亡水平的變化，由此考查hnRNPA1及TFF3在腫瘤細(xì)胞中的生物學(xué)作用。
　　 通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)，TFF3和hnRNPA1的免疫熒光和免疫熒光共聚焦具有明顯的共定位一致性，同時(shí)hnRNPA1基因沉默能夠明顯抑制BGC-823細(xì)胞的遷移能力、生長(zhǎng)活性、侵襲能力，凋亡水平，同時(shí)TFF3基因沉默能夠明顯抑制BGC-823細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力，并降低