大腸埃希菌對(duì)恩諾沙星及苯扎溴銨交叉耐藥變遷的分子機(jī)制研究.pdf

1、喹諾酮類藥物及消毒劑在人類及動(dòng)物的臨床使用中扮演著舉足輕重的角色，但各類細(xì)菌對(duì)喹諾酮類藥物及消毒劑的耐藥問(wèn)題已日益嚴(yán)峻，不同地區(qū)的不同菌群對(duì)喹諾酮類藥物及消毒劑的耐藥率也呈逐年上升的趨勢(shì)，有關(guān)大腸埃希菌對(duì)喹諾酮類藥物和季銨鹽消毒劑的耐藥機(jī)制已有大量報(bào)道，同時(shí)也有報(bào)道表明細(xì)菌對(duì)喹諾酮類藥物和消毒劑之間存在交叉耐藥，但交叉耐藥變遷的分子機(jī)制還未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)主要分別以不同濃度恩諾沙星和苯扎溴銨不同頻次作用大腸埃希菌獲得的不同耐藥表型的菌株為

2、研究對(duì)象，進(jìn)行交叉耐藥變遷的分子機(jī)制研究，旨在為臨床合理使用抗菌藥和消毒劑提供理論基礎(chǔ)。
　　1、恩諾沙星/苯扎溴銨誘導(dǎo)大腸埃希菌ATCC25922獲得不同耐藥表型菌株
　　采用微量肉湯法測(cè)定恩諾沙星/苯扎溴銨對(duì)大腸埃希菌ATCC25922的MIC。采用多步法以不同濃度(1/2×MIC、1×MIC……128×MIC)恩諾沙星/苯扎溴銨分別多次對(duì)大腸埃希菌ATCC25922進(jìn)行體外誘導(dǎo)，并檢測(cè)每一步處理后兩藥對(duì)受試菌株MIC的

3、變化情況。
　　結(jié)果：
　　通過(guò)1/2×MIC、1×MIC……128×MIC濃度恩諾沙星對(duì)大腸埃希菌ATCC25922體外誘導(dǎo)各20代，得到恩諾沙星MIC增加8、16、32、64、128倍的耐藥株5株：E8、E16、E32、E64、E128；通過(guò)1/2×MIC、1×MIC……16×MIC濃度苯扎溴銨對(duì)大腸埃希菌ATCC25922體外誘導(dǎo)各50代，得到苯扎溴銨MIC增加1、2、4、8、16倍的耐藥株4株：B2、B4、B8、B1

4、6。
　　結(jié)論：
　　不同濃度恩諾沙星和苯扎溴銨誘導(dǎo)大腸埃希菌后可得到不同耐藥表型菌株，耐恩諾沙星株較耐苯扎溴銨株更容易獲得，體外誘導(dǎo)耐苯扎溴銨株不能產(chǎn)生高倍耐藥。
　　2、不同耐藥表型菌株對(duì)恩諾沙星和苯扎溴銨交叉耐藥性分析
　　采用微量肉湯法測(cè)定恩諾沙星對(duì)B2、B4、B8、B16的MIC和苯扎溴銨對(duì)E8、E16、E32、E64、E128的MIC。
　　結(jié)果：
　　B2、B4、B8、B16對(duì)恩諾沙星的

5、MIC分別增加4、8、16、32倍；E8、E16、E32、E64、E128對(duì)苯扎溴銨的MIC分別增加4、8、16、16、64倍。
　　結(jié)論：
　　某一藥物誘導(dǎo)所得不同耐藥表型菌株對(duì)另一藥物也呈不同程度耐藥，且耐藥性隨耐藥株對(duì)某藥物耐藥性的增加而增加。
　　3、恩諾沙星/苯扎溴銨耐藥變遷的分子機(jī)制研究
　　檢測(cè)E8、E16、E32、E64、E128耐藥基因gyrA和gyrB、parC和parE、acrA、acrB、

6、tolC、acrZ誘導(dǎo)前后的變異情況，檢測(cè)該5株菌acrA、acrB、tolC、acrZ、emrA/B、mdfA誘導(dǎo)前后表達(dá)量變化情況以及質(zhì)粒耐藥基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac-6’-Ib-cr、qepA/B誘導(dǎo)前后檢出率變化情況；檢測(cè)B2、B4、B8、B16耐藥基因tehA/B、ydgE/F、acrA、acrB、tolC、acrZ誘導(dǎo)前后的變異情況及sugE、tehA/B、ydgE/F、acrA、acrB

7、、tolC、acrZ、emrA/B、emrE、mdfA誘導(dǎo)前后表達(dá)量的變化情況。
　　結(jié)果：
　　恩諾沙星誘導(dǎo)耐藥株質(zhì)粒耐藥基因的檢出率為0；耐藥基因 gyrA和gyrB、parC和parE、tehA/B、ydgE/F、acrA、acrB、tolC、acrZ中除tehA/B、ydgE/F和 acrZ外均有不同程度的堿基和氨基酸序列突變，且突變位點(diǎn)隨菌株耐藥性的增加而增多；基因 sugE、tehA/B、ydgE/F、acrA、

8、acrB、tolC、emrA/B、emrE、mdfA的表達(dá)量都隨著耐藥性的增加而表現(xiàn)為顯著和極顯著增加，acrZ顯著減少。
　　結(jié)論：
　　誘導(dǎo)所得耐藥菌株耐藥表型與各耐藥基因的突變與表達(dá)量變化密切相關(guān)。
　　4、恩諾沙星和苯扎溴銨交叉耐藥變遷的分子機(jī)制研究
　　檢測(cè)誘導(dǎo)E8、E16、E32、E64、E12、B2、B4、B8、B16耐藥基因acrA、acrB、tolC、acrZ誘導(dǎo)前后的變異情況和acrA、acr

9、B、tolC、acrZ、emrA/B、mdfA表達(dá)量的變化情況。
　　結(jié)果：
　　兩類耐藥菌株中除 acrZ基因未發(fā)生氨基酸突變外，其他基因都有相同堿基和氨基酸序列突變；7個(gè)基因除 acrZ基因表達(dá)量顯著減少外，其他基因都顯著或極顯著增加。且在兩種藥物誘導(dǎo)所得株中，acrA基因的表達(dá)量都表現(xiàn)為隨著耐藥表型的每一次改變都顯著增加，而其他基因則表現(xiàn)為1次或幾次的顯著增加。
　　結(jié)論：
　　大腸埃希菌對(duì)恩諾沙星和苯扎溴