活血解毒中藥干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊的作用及機(jī)理研究.pdf

1、目前,動(dòng)脈粥樣硬化(AS)易損斑塊在導(dǎo)致急性心血管事件方面的重要性已受廣泛重視。改善易損斑塊內(nèi)部成分,使其趨于穩(wěn)定,成為防治急性心血管事件的重要內(nèi)容。隨著“AS炎癥反應(yīng)”學(xué)說(shuō)的公認(rèn),為中醫(yī)產(chǎn)生新的冠心病病機(jī)學(xué)說(shuō)、更新治療觀念提供了良好契機(jī)。我們?cè)诩韧鶆?dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上,提出“活血解毒——抑制炎癥反應(yīng)——穩(wěn)定斑塊”的假說(shuō),并從基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)兩個(gè)方面展開(kāi)研究。
　　 1.基礎(chǔ)研究:活血解毒中藥對(duì)ApoE基因敲除(ApoE-/-

2、)小鼠斑塊穩(wěn)定性的影響及機(jī)制探討。
　　 目的:觀察活血(三七總皂苷)、解毒(黃連提取物)、活血解毒(虎杖提取物、大黃醇提物)中藥有效部位對(duì)ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性的影響,并從抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和改善膠原沉積及代謝三個(gè)角度探討其作用機(jī)制。
　　 方法:70只ApoE-/-,小鼠經(jīng)“西方膳食”飼料喂養(yǎng)13周后,隨機(jī)取4只小鼠觀察基礎(chǔ)AS病變水平。其余小鼠隨機(jī)分為6組:虎杖提取物組、大黃醇提物組、黃連提

3、取物組、三七總皂苷組、辛伐他汀組、模型組各11只,并以同品系C57BL/6J小鼠10只作為正常對(duì)照。繼續(xù)高脂喂養(yǎng)并按體重比折算的臨床推薦劑量給予相應(yīng)藥物治療13周后,處死取主動(dòng)脈根部的4個(gè)切面,分別行HE染色、Movat染色、苦味酸天狼星紅染色以及免疫組織化學(xué)染色法觀察斑塊內(nèi)部成分,同時(shí)取血清用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)炎性相關(guān)指標(biāo),實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)小鼠主動(dòng)脈內(nèi)相關(guān)基因表達(dá),觀察并計(jì)算:1)主動(dòng)脈斑塊形態(tài)變化:包括斑塊面積

4、,細(xì)胞外脂質(zhì)、泡沫細(xì)胞、膠原成分各自占斑塊面積的百分比以及斑塊內(nèi)脂質(zhì)成分與膠原成分比值,埋藏纖維帽數(shù)目以及纖維帽占斑塊表層比值,并結(jié)合免疫組化染色半定量觀察斑塊內(nèi)平滑肌細(xì)胞的陽(yáng)性面積,最后采用易損指數(shù)綜合評(píng)價(jià)藥物對(duì)小鼠主動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的影響；2)血脂改變及對(duì)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因周脂素和清道夫受體CD36的基因表達(dá)影響；3)炎性指標(biāo):血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)和可溶性白細(xì)胞分化抗原配體(sCD40L)水平、斑塊內(nèi)粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落細(xì)

5、胞刺激因子(GM-CSF)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)的表達(dá)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPAR-γ)和核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)的基因表達(dá)；4)膠原的合成代謝:Ⅰ、Ⅲ型膠原的組成、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)及組織金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP-1)的表達(dá)。
　　 結(jié)果:(1)無(wú)論是在改善斑塊易損指數(shù)方面,還是在修復(fù)斑塊纖維帽的能力方面,活血解毒中藥虎杖提取物及大黃醇提物組,均優(yōu)于單純活血中藥三七總皂苷和單純解毒中藥

6、黃連提取物組。綜合評(píng)價(jià)藥物穩(wěn)定斑塊的作用,上述藥物表現(xiàn)出的趨勢(shì)是活血解毒中藥>清熱解毒中藥>活血化瘀中藥；(2)虎杖提取物和大黃醇提物還可明顯降低ApoE-/-小鼠血清炎癥標(biāo)志物hsCRP及sCD40L水平,優(yōu)于活血對(duì)照藥三七總皂苷和解毒對(duì)照藥黃連提取物,這與穩(wěn)定斑塊的作用相平行。各中藥組對(duì)斑塊內(nèi)炎性因子GM-CSF表達(dá)均有一定抑制作用,大黃醇提物還可明顯抑制TNF-α表達(dá),而黃連提取物組則明顯促進(jìn)斑塊內(nèi)PPAR-γmRNA和蛋白表達(dá)；

7、(3)各中藥組可不同程度調(diào)節(jié)ApoE-/-小鼠血清脂蛋白水平,減少斑塊內(nèi)細(xì)胞外脂質(zhì)成分,其中大黃醇提物、黃連提取物還可明顯抑制斑塊內(nèi)perilipin mRNA表達(dá),但各中藥組清道夫受體CD36的基因表達(dá)無(wú)顯著影響；(4)各中藥組均可明顯增加斑塊內(nèi)膠原纖維成分,降低Ⅲ/Ⅰ型膠原比值,其中虎杖提取物、三七總皂苷、黃連提取物組MMP-9/TIMP-1比值亦明顯降低。
　　 結(jié)論:活血、解毒及活血解毒中藥有效部位三七總皂苷、黃連提取物

8、、虎杖提取物、大黃醇提物在臨床推薦劑量上均可通過(guò)改善斑塊內(nèi)部成分發(fā)揮穩(wěn)定易損斑塊的作用,但其作用環(huán)節(jié)有所差異。其中,兼有活血和解毒作用的中藥虎杖提取物、大黃醇提物效果最為顯著。其機(jī)制可能與抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和改善膠原沉積及代謝有關(guān),尤以抑制炎癥反應(yīng)為最主要機(jī)制,驗(yàn)證了“活血解毒——抑制炎癥反應(yīng)——穩(wěn)定斑塊”的假說(shuō)。
　　 2.臨床研究:活血解毒中藥對(duì)冠心病穩(wěn)定期患者血清炎癥標(biāo)記物的影響。
　　 目的:以新清寧片(

9、熟大黃)為活血解毒中藥的代表藥物、以丹七片為活血對(duì)照藥,觀察在常規(guī)他汀類(lèi)藥物治療基礎(chǔ)上加用新清寧或丹七片對(duì)冠心病穩(wěn)定期患者血清炎癥標(biāo)志物的影響。
　　 方法:將30例冠心病穩(wěn)定期患者隨機(jī)分為三組:他汀對(duì)照組,予他汀類(lèi)降脂藥常規(guī)治療；活血中藥治療組,在他汀類(lèi)藥物常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用丹七片,每次三片(0.3g/片),每天3次；活血解毒中藥治療組,在他汀類(lèi)藥物常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用新清寧片,每次三片(0.3g/片),每天3次。每組10例。治

10、療1個(gè)月后,觀察患者治療前后血清hs-CRP、TNF-α、MMP-9和CD40L濃度變化,血脂水平,心絞痛癥狀和血瘀證積分變化。
　　 結(jié)果:無(wú)論是降低冠心病患者血清hs-CRP濃度、調(diào)節(jié)血脂還是降低患者心絞痛癥狀和血瘀證積分方面,活血解毒中藥治療組(他汀藥常規(guī)治療加用新清寧片)均表現(xiàn)出良好作用,優(yōu)于他汀藥對(duì)照組及活血中藥治療組(他汀藥常規(guī)治療加丹七片)。但各組對(duì)血清TNF-α、MMP-9和CD40L水平影響無(wú)顯著差異。