非小細(xì)胞肺癌中EGFR基因狀態(tài)與CAR表達(dá)之間關(guān)系的研究.pdf

1、目的：以人類非小細(xì)胞肺癌為研究對(duì)象，檢測CAR在EGFR突變型和EGFR野生型樣本中的表達(dá)情況，比較二者間的差異，著重探討EGFR基因突變與CAR在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)系。分析EGFR-TKIs治療EGFR突變型NSCLC的可能機(jī)理，為EGFR-TKIs與腺病毒載體共同應(yīng)用治療腫瘤提供理論依據(jù)。
　　方法：收集新鮮非小細(xì)胞肺癌手術(shù)標(biāo)本300例及其對(duì)應(yīng)的正常肺組織(距離瘤組織5cm以上距離的肺組織)。標(biāo)本收集嚴(yán)格按照無菌操作，收集

2、的標(biāo)本馬上放入液氮中，-80℃保存，同時(shí)收集所有患者資料，將完整資料存放待最后分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。首先應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測EGFR exon19和exon21突變狀態(tài)，然后隨機(jī)選取50例為突變組和50例野生組：分別用免疫組織化學(xué)和western blot檢測pEGFR、CAR蛋白的表達(dá)情況；分析CAR在EGFR突變型和EGFR野生型樣本中的表達(dá)情況，探討二者相互關(guān)系和作用。
　　結(jié)果：
　　1.EGFR基因突變狀態(tài)

3、>　　突變型例數(shù)為102例，野生型者為198例；集中表現(xiàn)在外顯子19和21突變。其中外顯子19突變型者為66例，外顯子21突變者為36例。
　　2.CAR、pEGFR蛋白的表達(dá)情況：
　　隨機(jī)選取50例突變型和50例野生型分為兩組，免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：48例(48％)CAR蛋白的表達(dá)陽性，其中EGFR突變型者中34例(68％)表達(dá)CAR，野生型者中14例(28％)表達(dá)CAR。52例p-EGFR蛋白的表達(dá)陽性，EGFR突變型

4、者中40例(80％)p-EGFR陽性，野生型者12例(24％)陽性。
　　Western blot方法檢測CAR在EGFR突變型和EGFR野生型肺癌組織表達(dá)量分別為1.220±0.269，0.891±0.144，pEGFR蛋白在EGFR突變型和EGFR野生型肺癌組織表達(dá)量分別1.165±0.206，0.922±0.125，CAR和pEGFR蛋白表達(dá)差異在EGFR突變型和EGFR野生型肺癌組織間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，且在各組

5、間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.CAR蛋白和pEGFR蛋白的表達(dá)與EFGR基因突變具有相關(guān)性，EGFR突變的NSCLC中CAR和pEGFR高表達(dá)，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05。CAR蛋白和pEGFR蛋白的表達(dá)與EFGR基因突變類型不相關(guān)，P>0.05。
　　4.CAR蛋白和pEGFR蛋白在EGFR突變型和野生型肺癌組織中表達(dá)的具有相關(guān)性二者表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.448，P=0.026)。
　　結(jié)論：
　　1.

6、基因突變與p-EGFR表達(dá)：EGFR突變集中表現(xiàn)在外顯子19和21，其中外顯子19突變型者多于外顯子21突變者。EGFR基因突變?cè)诜蜗侔┲邪l(fā)生率較高，外顯子19的突變率高于外顯子21的突變率。EGFR基因突變?cè)谂苑俏鼰熁颊咧邢侔└?，與性別、吸煙史和病理類型有關(guān)。
　　2.應(yīng)用IHC和Western blot兩種方法檢測CAR和pEGFR在EGFR突變型和野生型非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)，這二者表達(dá)不同，即CAR和EGFR蛋白在EG

7、FR突變型和EGFR野生型非小細(xì)胞肺癌組織問表達(dá)不同。
　　3.EGFR基因突變與p-EGFR表達(dá)、CAR表達(dá)之間的關(guān)系：非小細(xì)胞肺癌中CAR的表達(dá)與p-EGFR表達(dá)呈正相關(guān)，并與EGFR基因突變呈正相關(guān)性，但與基因突變類型不相關(guān)。
　　4.如果CAR表達(dá)與EGFR基因突變共同作用于肺癌的形成機(jī)制，那么拮抗CAR的抗體有望成為輔助EGFR-TKI的靶向治療藥物。若然不是肺癌形成的促進(jìn)因子，則肺癌組織中CAR的高表達(dá)則有利于腺