CCR2、CXCR3及其配體在動脈粥樣硬化小鼠中的表達(dá)研究.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)所導(dǎo)致的冠心病、心肌梗塞等心血管病是危害人類健康的重大疾患。眾多研究表明，AS是一種慢性炎癥性疾病，炎癥反應(yīng)參與血管內(nèi)膜損傷和AS的發(fā)生發(fā)展，外周血中的單核細(xì)胞向動脈壁內(nèi)膜損傷部位及AS病變部位的遷移、聚集、粘附及活化是AS發(fā)生和發(fā)展過程中的中心事件，而趨化因子及其受體在這一過程中起重要作用。
　　趨化因子(chemokines)是一類結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)的小分子肝素結(jié)合蛋白超家族成員

2、，在白細(xì)胞向炎癥及損傷部位的運(yùn)動、遷移、聚集及隨后的活化過程中起著重要作用。趨化因子的生物活性主要是通過與其靶細(xì)胞表面相應(yīng)的趨化因子受體結(jié)合而發(fā)揮作用的。單核細(xì)胞趨化蛋白(monocyte chemoattractant proteins，MCPs)是趨化細(xì)胞因子CC亞家族最具代表性的成員，其對單核細(xì)胞具有很強(qiáng)的趨化作用，其受體為趨化因子受體-2(chemokine receptor-2，CCR2)，主要表達(dá)于單核細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞表面。

3、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)是CCR2的主要配體，在單核細(xì)胞向AS病變部位募集過程中起重要作用。CXC趨化因子受體3(CXC chemokine receptor3，CXCR3)，作為CXCL9(monokine-induced by IFN-γ，Mig)，CXCL10(IFN-γ-induced protein of10 kDa，IP-10)和CXCL11(I

4、FN-γ-inducible T cellα-chemoattractant，I-TAC)的共同受體，主要表達(dá)于活化的Th1細(xì)胞表面，負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)Th1細(xì)胞的遷移。最近的研究表明CXCR3對T細(xì)胞向AS病變部位的募集及調(diào)節(jié)AS病變內(nèi)Th1細(xì)胞的反應(yīng)具有重要作用。
　　因此，為了更好的闡明CCR2，CXCR3及其相關(guān)趨化因子與AS的相關(guān)性及其在AS發(fā)生和發(fā)展過程中所起的重要作用，本實(shí)驗(yàn)以高脂高膽固醇飲食飼喂的apoE基因缺失(apoli

5、poprotein E-null mice，apoE-/-)小鼠為AS實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停到y(tǒng)地檢測了AS發(fā)生及發(fā)展各個(gè)時(shí)期CCR2，CXCR3及其相關(guān)趨化因子在主動脈中的表達(dá)，并初步探討了體內(nèi)AS發(fā)生早期MCP-1在血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)中表達(dá)的相關(guān)分子機(jī)制。
　　本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示:
　　伴隨著高血脂的發(fā)生和AS病變的發(fā)生和發(fā)展，MCP-1、CCR2和CXCR3 mRN

6、A表達(dá)水平在AS早期即顯著升高，且其上升一直持續(xù)至AS發(fā)展的中期。IP-10和I-TAC的表達(dá)在AS起始階段也顯著上升，并于高脂高膽固醇飲食飼喂第4周后其表達(dá)水平達(dá)到最高。Mig的表達(dá)在早期升高并不明顯，但在8周時(shí)顯著升高，而MCP-2和MCP-3的表達(dá)只在AS發(fā)展的后期有所升高。免疫組織化學(xué)檢測的結(jié)果顯示，apoE-/-小鼠AS起始階段動脈壁內(nèi)MCP-1的表達(dá)主要來源于VSMCs，隨著AS病變的不斷發(fā)展，在較為嚴(yán)重的病變內(nèi)，新生內(nèi)膜的

7、VSMCs和巨噬細(xì)胞都成為MCP-1的主要來源。在AS早期(高脂高膽固醇飲食飼喂0和4周)VSMCs表達(dá)MCP-1的同時(shí)，MCP-1相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子活化蛋白-1(activator protein-1，AP-1)的c-Jun和c-Fos亞基在VSMCs中大量表達(dá)并且能夠清晰的觀察到其在細(xì)胞核內(nèi)的定位，而核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB) p65亞基只在高脂高膽固醇飲食飼喂4周后觀察到其在VSMCs細(xì)胞核內(nèi)

8、的定位。此外，本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，在較為嚴(yán)重AS病變內(nèi)除了巨噬細(xì)胞外，內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells，ECs)和VSMCs也能夠表達(dá)CCR2.
　　以上結(jié)果為AS發(fā)生和發(fā)展過程中CCR2，CXCR3及其相關(guān)趨化因子的表達(dá)提供了重要信息，并且提示中膜VSMCs可能是在AS發(fā)生早期MCP-1的主要來源，而AP-1信號通路可能在最初MCP-1在VSMCs的表達(dá)中起重要作用。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的CCR2在AS病變中ECs和VSMCs