MicroRNAs在動脈粥樣硬化血管中的異常表達(dá).pdf

1、目的：動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展與心腦血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)的microRNA-221/222能通過抑制轉(zhuǎn)錄因子ETS-1的表達(dá)進(jìn)而減輕AngII誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)，而炎癥的病理過程貫穿于動脈粥樣硬化全過程，因此本課題我們在體分析了microRNAs在動脈粥樣硬化斑塊中的表達(dá)及功能。采用硅膠套管植入法制作 ApoE-/-小鼠頸總動脈斑塊快速形成模型，并通過實時熒光定量 PCR技術(shù)對心血管疾病相關(guān)的 m

2、icroRNA-125b、microRNA-221、microRNA-156、microRNA-23a、microRNA-22及其靶基因在對照和模型小鼠頸總動脈組織中的差異表達(dá)進(jìn)行了檢測，以期能夠進(jìn)一步闡明MicroRNA在動脈粥樣硬化斑塊增殖和炎癥反應(yīng)中的作用。
　　方法：⑴動脈粥樣硬化小鼠模型的建立：在10-12周齡小鼠頸部，利用硅膠套管內(nèi)徑小于血管內(nèi)徑的方式，通過手術(shù)方式，在其頸總動脈固定一5mm長的硅膠套管，縮窄頸總動脈。

3、小鼠經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)16周后，觀察頸動脈血管變化，并通過蘇木素-伊紅染色、油紅O染色進(jìn)行組織學(xué)分析，檢測動脈粥樣硬化的發(fā)生情況。⑵病理組織切片：蘇木素-伊紅染色法、油紅O染色法制作病理組織切片，對比血管內(nèi)壁病理學(xué)差異改變。⑶基因芯片技術(shù)檢測動脈粥樣硬化中的microRNAs表達(dá)。⑷熒光定量PCR技術(shù)：實時熒光定量PCR檢測血管斑塊中microRNAs的表達(dá)。
　　結(jié)果：ApoE-/-小鼠頸總動脈縮窄手術(shù)后，高脂飲食喂養(yǎng)16周后，麻醉

4、，切開頸部皮膚，顯露頸總動脈，于頸總動脈套管處可見呈黃色的動脈粥樣硬化斑塊遍及血管腔內(nèi)。血管組織固定、脫水后，經(jīng)油紅O染色，可見血管內(nèi)皮細(xì)胞下有大量大小不等的泡沫細(xì)胞，炎性細(xì)胞，纖維肉芽組織等，血管管腔內(nèi)可伴有出血、脂質(zhì)沉積。通過基因芯片對 microRNAs表達(dá)進(jìn)行檢測，顯示microRNA-23，microRNA-142-5p等在動脈粥樣硬化的 Apo-E-/-小鼠血管組織含量明顯高于普通C57小鼠的血管組織含量。實時熒光定量PCR

5、對動脈粥樣硬化斑塊中microRNAs進(jìn)行表達(dá)檢測，顯示實驗組與對照組的血管組織中，其中MicroRNA23在實驗組動物血管組織中的表達(dá)量（2.74±0.37），明顯高于在對照組中（1±0.22），其中實驗組P﹤0.05，對照組P﹤0.01，n=6，表明MicroRNA23表達(dá)量明顯高于對照組，且microRNA-23a的表達(dá)量是對照組的3倍。與基因芯片結(jié)果相一致。
　　結(jié)論：本工作發(fā)現(xiàn)在小鼠動脈粥樣模型中，多種microRNAs