細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路在香煙煙霧致肺血管重構(gòu)中的調(diào)控機(jī)制.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶在吸煙伴或不伴有慢性阻塞性肺疾病患者肺血管中的表達(dá)及其與肺血管重塑的關(guān)系
　　目的:探討吸煙伴或不伴有慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者肺血管重塑中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶( extracellular signal-regulated kinase, ERK)的表達(dá)及意義。
　　方法

2、:取48份(吸煙患 COPD組16例、吸煙不患 COPD組18例、不吸煙不患COPD組14例)手術(shù)切除的肺組織,HE染色觀察肺血管重塑;用Western blot檢測(cè) ERK及cyclinD1在肺動(dòng)脈的表達(dá);實(shí)時(shí)熒光 RT-PCR檢測(cè) cyclinD1 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:與非吸煙對(duì)照組比較,吸煙不伴 COPD組肺血管壁厚度和血管直徑比值(％WT)明顯增加,ERK及cyclinD1表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)

3、。吸煙不伴 COPD組與吸煙伴 COPD組相比較,肺血管壁厚度和血管直徑比值及ERK的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:吸煙伴或不伴有 COPD患者肺動(dòng)脈 ERK和cyclinD1的表達(dá)均較不吸煙者明顯升高,ERK的高表達(dá)可能與香煙煙霧導(dǎo)致的肺血管重構(gòu)有關(guān)。
　　第二部分 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶參與香煙煙霧提取物促進(jìn)人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖
　　目的:探討細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regu

4、lated kinase, ERK)在香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract, CSE)所致人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(human pulmonary artery smooth muscle cells, HPASMCs)增殖中的作用。
　　方法:原代培養(yǎng)的HPASMCs予以 CSE干預(yù)。細(xì)胞隨機(jī)分為四組:正常對(duì)照組;5﹪CSE組;PD98059+5﹪CSE組;PD98059組。采用細(xì)胞計(jì)數(shù)及四甲基偶氮唑鹽比色法

5、(MTT)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的分布。用Western blot檢測(cè) ERK及cyclinD1在 HPASMCs的表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光 RT-PCR檢測(cè)cyclinD1 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:在5％CSE的刺激下,HPASMCs的ERK mRNA和蛋白水平均升高,并促進(jìn)細(xì)胞增殖(P<0.01)。PD98059抑制5％CSE誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖(P<0.01)。此外,PD98059明顯抑制cyclinD1的mRNA和

6、蛋白的表達(dá),并導(dǎo)致細(xì)胞周期 G1期停滯,進(jìn)而減少 HPASMCs的增殖(P<0.01)。
　　結(jié)論:ERK在 CSE誘導(dǎo) HPASMCs增殖中發(fā)揮重要作用,其部分原因可能是其上調(diào) cyclinD1的表達(dá)。
　　第三部分 還原型輔酶Ⅱ氧化酶參與香煙煙霧提取物促進(jìn)人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖
　　目的:探討還原型輔酶Ⅱ(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADPH)氧化酶在

7、香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract, CSE)所致人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(human pulmonary artery smooth muscle cells, HPASMCs)增殖中的作用。
　　方法:原代培養(yǎng)的HPASMCs予以 CSE干預(yù)。細(xì)胞隨機(jī)分為四組:正常對(duì)照組;5﹪CSE組;apocynin+5﹪CSE組;apocynin組。采用細(xì)胞計(jì)數(shù)及四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力。流式

8、細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的分布。用Western blot檢測(cè) NADPH氧化酶亞基 p47phox及細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)在 HPASMCs的表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè) p47phox mRNA的表達(dá)。比色法檢測(cè)丙二醛(malondiadehyde, MDA)表達(dá)。
　　結(jié)果:在5％CSE的刺激下,HPASMCs中的p47phox以及ERK表達(dá)水平