禽副粘病毒2型的血清學(xué)調(diào)查、M基因序列測定及中國分離株的研究.pdf

1、禽副粘病毒2型(APMV-2)是副粘病毒科、禽腮腺炎病毒屬的成員，是養(yǎng)禽生產(chǎn)中的常見病原之一。本研究主要進(jìn)行了APMV-2的血清流行病學(xué)調(diào)查，采用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)克隆了APMV-2的M基因，制備了APMV-2的血凝素特異性單克隆抗體，并開展了對四株APMV-2中國國內(nèi)分離株的研究。 2003到2005年從包括雞、鴨、孔雀、麻雀、鴕鳥和鷓鴣在內(nèi)的6個(gè)的禽種收集了9156份血清，采用血凝抑制實(shí)驗(yàn)(HI)對APMV

2、-2抗體的流行情況進(jìn)行了檢測。結(jié)果表明，APMV-2在中國不同禽種的感染普遍存在，雞、鴨、孔雀、鴕鳥和鷓鴣的平均血清陽性率分別為42.9％，25.1％，45.8％，47.6％和80.0％。APMV-2在我國不同類型雞群(SPF雞群除外)、不同品種雞群有著100％的感染率。 采用RACE技術(shù)獲得了APMV-2病毒M基因的全編碼序列。對M基因的序列分析結(jié)果表明，APMV-2病毒M基因的大小為1089bp，編碼362個(gè)氨基酸，分子量約

3、為39.727kDa。APMV-2病毒M基因與其它副粘病毒M基因的核苷酸和氨基酸序列同源性均較低，其中與APMV-6的同源性最高，同源性分別為43.88％和45％。 利用純化的Yucaipa病毒免疫Balb/c小鼠，將免疫小鼠的脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合，制備得到了一株能分泌APMV-2血凝素特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，代號為1G4A7。對單克隆抗體1G4A7的鑒定結(jié)果表明，該單抗的IgG亞類為IgGl，輕鏈類型為

4、k鏈。腹水中單克隆抗體1G4A7的ELISA效價(jià)為106，HI效價(jià)為210。單抗1G4A7與其它常見禽類病毒沒有交叉反應(yīng)。 對四株APMV-2國內(nèi)分離株進(jìn)行了研究，主要內(nèi)容包括分離株病毒的形態(tài)學(xué)觀察、血清學(xué)關(guān)系和抗原性差異分析以及F基因和HN基因的序列測定分析。電鏡觀察結(jié)果表明，APMV-2分離毒在形態(tài)結(jié)構(gòu)上與標(biāo)準(zhǔn)株Yucaipa沒有明顯的差異，病毒粒子一般呈球形或橢圓形，大小差別較大。采用HI和間接ELISA方法對APMV-2

5、國內(nèi)分離毒血清學(xué)關(guān)系和抗原性差異的分析結(jié)果表明，APMV-2國內(nèi)分離株在血清學(xué)關(guān)系和抗原性關(guān)系上均存在一定的差異，其中國內(nèi)雞源分離株與Yucaipa病毒在血清學(xué)關(guān)系上更為密切。對APMV-2國內(nèi)分離株的F基因和HN基因的序列分析結(jié)果表明，APMV-2各毒株間F基因和HN基因的核苷酸和氨基酸同源性均很高，個(gè)別核苷酸或氨基酸的變異有何意義仍需進(jìn)一步研究。此外我們還對APMV-2國內(nèi)雞源分離株F8和NK的致病性進(jìn)行了初步研究，研究結(jié)果表明F8