RNA干擾抑制MACC1對(duì)大腸癌細(xì)胞增殖及其與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)系的研究.pdf

1、目的:探討采用RNA干擾方法抑制MACC1基因表達(dá)對(duì)大腸癌細(xì)胞SW620增殖及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo),將設(shè)計(jì)并合成的靶向MACC1特異性的MACC1-siRNA轉(zhuǎn)染入人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620,同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照和空白對(duì)照。倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的變化情況,并繪出各組細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。采用Western blot技術(shù)檢測(cè)空白組(正常非

2、轉(zhuǎn)染組)、陰性對(duì)照組和MACC1siRNA組細(xì)胞E-cadherin和Vimentin的表達(dá)。細(xì)胞免疫熒光染色觀察E-cadherin和Vimentin在SW620細(xì)胞中MACC1干預(yù)下的表達(dá)。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察鬼筆環(huán)肽染色后細(xì)胞骨架微絲的變化。
　　結(jié)果:SW620細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效率約為70-80％。倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染MACC1-siRNA后,SW620細(xì)胞增殖明顯減弱,細(xì)胞數(shù)量減少。MTT結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組和空

3、白對(duì)照組相比,RNAi組細(xì)胞增殖能力明顯減弱(P均<0.05)。Western Blot結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,MACC1siRNA組Vimentin的表達(dá)顯著減弱(P<0.05),E-cadherin的表達(dá)顯著增強(qiáng)(P<0.05)。免疫細(xì)胞熒光結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染MACC1-siRNA能顯著降低SW620細(xì)胞的Vimentin的表達(dá)而促進(jìn)E-cadherin的表達(dá)。激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)干擾MACC1表達(dá)后SW620細(xì)胞表面微絲減少,變稀