JAK2-STAT3通路在緩激肽后處理心肌保護(hù)作用中的機(jī)制研究.pdf

1、目的:心肌缺血再灌注損傷是缺血性心臟病以及心臟手術(shù)后心功能不全的主要病理基礎(chǔ)。尋找有效的心肌保護(hù)措施減輕心肌缺血再灌注損傷具有重要意義。雖然缺血預(yù)處理與后處理可以顯著減少再灌注后心肌梗死面積,心肌水腫及炎癥反應(yīng),但這些機(jī)械性保護(hù)措施在臨床應(yīng)用上受到極大的限制。緩激肽后處理可以模擬缺血后處理發(fā)揮心肌保護(hù)作用,并且可以減少對(duì)主動(dòng)脈的操作,減少并發(fā)癥,因而具有更廣闊的應(yīng)用前景。緩激肽后處理心肌保護(hù)詳細(xì)機(jī)制目前不十分清楚。JAK-STAT途徑的

2、主要作用是將細(xì)胞外信號(hào)傳遞到細(xì)胞核,進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄引發(fā)生物學(xué)效應(yīng),并在心肌缺血再灌注損傷以及內(nèi)源性心肌保護(hù)機(jī)制中具有重要作用。本課題在大鼠心肌缺血再灌注損傷模型下,以心肌梗死面積與心肌細(xì)胞凋亡為終點(diǎn),觀察緩激肽后處理心肌保護(hù)作用。探討JAK2-STAT3通路在緩激肽后處理心肌保護(hù)機(jī)制中的作用。
　　 方法:建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型,將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分成:(1)空白對(duì)照(sham)組:開胸后,左冠狀動(dòng)脈前降支處穿線,不阻

3、斷血管,穿線后10min或120 min或24h取標(biāo)本待檢測。(2)缺血再灌注(I-R)組:缺血30 min,再灌注10min或120min或24h取標(biāo)本待檢測。(3)緩激肽后處理(BK)組:缺血30 min,再灌注10min或120 min或24h取標(biāo)本待檢測,并于再灌注前給予緩激肽(200ug/kg)。(4)緩激肽后處理+AG490(BK+AG490)組:缺血30 min,再灌注10min或120 min或24h取標(biāo)本待檢測,再灌注

4、前給予緩激肽(200ug/kg),并于再灌注前5 min靜脈注射AG490(3 mg/kg)。(5)緩激肽后處理+wortmannin(BK+wortmannin)組:缺血30 min,再灌注10min取標(biāo)本待檢測,再灌注前給予緩激肽(200ug/kg),并于再灌注前5 min靜脈注射wortmannin(60ug/kg)。TTC染色法檢測再灌注2小時(shí)心肌梗死面積；TUNEL法檢測再灌注2小時(shí)及24小時(shí)心肌細(xì)胞凋亡水平:Western-

5、blot法檢測再灌注10分鐘磷酸化STAT3,磷酸化Akt水平反應(yīng)JAK2-STAT3通路,P13K/Akt通路激活情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.缺血再灌注長期損傷:Sham組未見明顯心肌細(xì)胞凋亡。I-R組再灌注24h細(xì)胞凋亡率明顯高于再灌注2h。
　　 2.緩激肽后處理的心肌保護(hù)作sham組未見明顯心肌梗死,各處理組AAR/LV差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BK組再灌注2小時(shí)Infarct size/AAR低于I-R組、

6、BK+AG490組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,緩激肽后處理顯著減少再灌注2h及24h心肌細(xì)胞凋亡比率；各處理組再灌注24h較2h心肌細(xì)胞凋亡比率均顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.JAK2-STAT3通路與緩激肽后處理心肌保護(hù)作用緩激肽后處理可以顯著上調(diào)再灌注10分鐘STAT3及Akt磷酸化水平,與I-R組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用JAK2阻斷劑AG490后,緩激肽后處理的心肌保護(hù)作用消失。
　　 4.JAK2-STAT3

7、通路對(duì)P13K/Akt通路的影響使用JAK2阻斷劑AG490可以消除緩激肽后處理對(duì)Akt的磷酸化激活作用,與緩激肽后處理組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而使用P13K阻斷劑wortmannin不能消除緩激肽后處理對(duì)STAT3的磷酸化激活作用。
　　 結(jié)論:
　　 1.缺血再灌注存在長期損傷機(jī)制,心肌細(xì)胞凋亡是其損傷形式之一。
　　 2.緩激肽后處理可以顯著減少再灌注2小時(shí)心肌梗死面積及心肌細(xì)胞凋亡比率,再灌注24小時(shí)仍可