JAK-STAT通路在兔心肌缺血后處理中的作用.pdf

1、目的： 白1999年國內(nèi)學者高峰等提出缺氧后處理(Hypoxic postconditioning HP)的概念后，國內(nèi)外多家機構在此基礎上通過研究進一步提出了缺血后處理(Ischemicpostconditioning IPO)的概念。即通過在心肌的再灌注早期經(jīng)過反復短暫的缺血與再灌注，能減少心律失常的發(fā)生，改善心功能，縮小梗死面積，減少心肌細胞凋亡。與Murry等人提出的預處理不同，后處理是在缺血后、再灌注之前進行反復短暫的

2、缺血與再灌注。后處理可對已發(fā)生的心肌缺血事件起到挽救的作用，彌補了不可預知缺血事件造成的慌亂，盡量減少心肌的損害，有其更大的應用前景。但對其機制的研究尚未有公認的結(jié)論，有待進一步研究。本文通過建立兔在體心肌缺血后處理模型，觀察JAK-STAT通路在心肌缺血后處理中的作用，進一步探討缺血后處理的機制問題。 方法： 將40只實驗用兔(雌雄兼有，體重2.5～3.0公斤)隨機分為四組。動物麻醉后取仰臥位，固定四肢及頭部，四肢連接

3、心電極；切開頸部皮膚組織，暴露氣管，倒“T“型剪開，插管連接呼吸機。剪開胸骨約4cm牽開器牽開固定，剪開心包，左室心尖部動脈穿刺針置入，連接壓力傳感器及監(jiān)測儀。組1(單純?nèi)毖俟嘧⒔M，I/R組，n=1.0)只進行簡單的缺血再灌注，暴露LAD(左室前降支)，以1號絲線于中上1/3處旁開1mm進針縫線，橫穿LAD，另一端旁開1mm出線，剪針，套管，阻斷LAD遠端血流(以心電圖ST段抬高為標志)30分鐘后，開放120分鐘。組2(單純?nèi)毖筇幚?/p>

4、組，IPO組，n=10)于LAD的中上1/3阻斷30分鐘，開放后30秒再予阻斷30秒，再開放，如此反復3次。即進行后處理，隨后再灌注120分鐘。組3(AG490+DMSO+IPO組，n=10)于阻斷后10分鐘給予以DMSO溶解的酪氨酸激酶抑制劑AG490(1mg/kg)，其他操作同組2。組4(DMSO+IPO組，n=10)于阻斷后10分鐘給予DMSO，其他操作同組2。以阻斷前10分鐘為起點，期間每十分鐘記錄一次心電圖及左室壓力情況。每組

5、分別于阻斷前、阻斷后20分鐘、開放后60分鐘、120分鐘抽取2ml血液作為標本，每組中，每個時間點的標本隨機分進兩組，分別進行CPK與ANP的檢測；最后處死，隨機分為兩組，一組取缺血區(qū)心肌留做標本，進行光鏡組織學檢查和細胞凋亡檢測；另一組進行TIC染色法測量心臟梗死面積。 結(jié)果： 1．CPK(creatine phosphatekinase CPK)的變化和ANP(Atrial natriuretic peptide A

6、NP)的變化各組的CPK于缺血、再灌注后均明顯增加，組2和組4CPK于再灌注后較組1顯著降低(P<0.01)，而組3與組1之間無顯著性差異(P>0.05)。各組ANP于缺血后20分明顯增加；再灌注后組2與組4ANP仍保持較高水平，和組1存在顯著性差異(P<0.05)，組3和組1之間差異性不顯著。 2．心電圖的變化組1的心電圖于再灌注后大多出現(xiàn)心律失常,如房早，室早，有的甚至出現(xiàn)室速、室顫，影響了心臟的收縮功能。其發(fā)生的時象多在開

7、放后1-15分鐘，15分鐘之外很少發(fā)現(xiàn)有心律失常。再灌注后1-20分鐘其ST段壓低明顯，隨著再灌注時間的延長，ST段逐漸回升，于再灌注末呈現(xiàn)ST的明顯抬高，并出現(xiàn)Q波，這種變化的趨勢很明顯。組2與組4的這種變化很小，再灌注后心律失常的發(fā)生率明顯降低，ST段抬高與壓低均不明顯，亦無明顯的Q波 3．心功能指標的變化±dp/dt max是反映左室收縮功能及舒張功能的重要指標，越靠近O點表明心功能越差，對比組1與組2，可看出組1心功能呈

8、下降趨勢；而組2不明顯，說明后處理對心功能起到了保護作用。組3波形也向0點線靠近，說明AG490阻斷了后處理的保護作用。 4．心肌細胞形態(tài)學變化本實驗組1與組3的細胞組織結(jié)構已經(jīng)完全打亂，心肌纖維排列稀疏，無序，細胞重度水腫．組2與組4的心肌病理改變明顯減輕，肌纖維排列整齊，肌纖維稍有稀疏，細胞水腫較組1與組2明顯減輕，呈輕度水腫． 5．心臟梗死面積變化與組1、組3比較，組2、組4的心臟梗死面積明顯減少。統(tǒng)計結(jié)果顯示組2

9、、組4的心臟梗死面積均與組1存在顯著差異(p<0.01)，組3與組1無顯著差異(P>0.05)。 6．心肌細胞凋亡變化在鏡下可以看到組1與組3的陽性率較高，并可見凋亡細胞經(jīng)常簇集在一起。組2與組4的心肌凋亡細胞相對較少，可見分散存在。進行統(tǒng)計結(jié)果顯示組2、組4的細胞凋亡千分率均小于組1(P<0.01)，組3與組1無顯著差異(P>0.05)，組2、組4間無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1．心肌缺血后處理可以