小檗堿通過JAK2-STAT3信號通路抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：探究小檗堿是否通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激導(dǎo)致的凋亡對心肌缺血再灌注損傷起保作用，以及此過程中JAK2/STAT3信號通路的作用。
　　方法：動物實驗80只雄性SD大鼠隨機分為四組：假手術(shù)組（Sham）、MI/R+溶劑對照組（MI/R+V）、MI/R+BBR治療組（MI/R+BBR）、MI/R+BBR+AG490組（MI/R+BBR+AG490），AG490為JAK2/STAT3信號通路特異性阻斷劑。建立大鼠MI/R損傷模型，心肌缺血

2、30min，再灌注72h后使用超聲心動圖法檢測各實驗組大鼠心臟功能指標(biāo)，再灌注6h后ELISA法檢測各組大鼠血清酶學(xué)相關(guān)指標(biāo)，TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡率，Evans blue-TTC雙染法測定梗死面積，Western blot法檢測p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Bcl-2、Bax、Caspase-3、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP的表達(dá)水平。
　　細(xì)胞實驗取對數(shù)生長

3、期的H9C2細(xì)胞株，隨機分為四組：對照組（Con）、SIR損傷組（SIR）、SIR+BBR預(yù)處理組（SIR+BBR）和SIR+BBR+JAK2siRNA預(yù)處理組（SIR+BBR+JAK2siRNA）。建立H9C2細(xì)胞系模擬缺氧/復(fù)氧（Simulated ischemia reperfusion，SIR）損傷模型，BBR預(yù)處理8h，細(xì)胞系缺氧2h，再灌注6h后TUNEL法檢測各組細(xì)胞系凋亡率，ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中超氧化物生成（Su

4、peroxide generation），Western blot法檢測JAK2/STAT3通路相關(guān)信號分子p-JAK2/t-JAK2、p-STAT3/t-STAT3及gp91phox、Bax、Bcl-2、caspase-3、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP等的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：動物實驗組中，MI/R手術(shù)顯著損傷心功能，上調(diào)superoxide generation、gp91phox及MD

5、A的表達(dá)，下調(diào)SOD表達(dá)，提高Bax、Caspase-3、凋亡率及梗死面積，下調(diào)p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Bcl-2、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP表達(dá)；BBR治療顯著改善心功能，減輕心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷，激活JAK2/STAT3信號通路，而AG490阻斷JAK2/STAT3信號通路后逆轉(zhuǎn)BBR的上述作用（均P<0.05）。
　　細(xì)胞實驗組中，SIR損傷后，顯著增加細(xì)

6、胞凋亡率、超氧化物生成、gp91phox、Bax、caspase-3、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP的表達(dá)水平，下調(diào)p-JAK2/t-JAK2、p-STAT3/t-STAT3、Bcl-2等的表達(dá)；BBR預(yù)處理可顯著減輕細(xì)胞系損傷，激活JAK2/STAT3通路，顯著下調(diào)細(xì)胞凋亡率、超氧化物生成、gp91phox、Bax、caspase-3、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4