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文檔簡介
1、目的:Fit<,3>基因是近年來在白血病研究中新發(fā)現的一種異常表達的基因,研究資料表明,Fit<,3>基因有望成為白血病檢測的標志性基因,本實驗通過對不同類型白血病患者外周血Fit<,3>基因表達與突變的研究,探討Fit<,3>基因與白血病發(fā)生的相關性,以骨髓標本對照,確定外周血Fit<,3>基因檢測白血病的新方法。 方法:從34例白血病患者和10名健康人外周血標本中抽提總RNA,以反轉錄——聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法擴增
2、Fit<,3>基因和β-Actin基因,采用凝膠分析軟件對RT-PCR產物進行半定量分析,比較兩組間差異。從外周血標本中提取基因組DNA,聚合酶反應(PCR)擴增Fit<,3>基因外顯子14-15,PCR產物經電泳純化后進行DNA測序分析。 結果:Fit<,3>基因mRNA表達:在34例標本中,19例急性髓系白血病患者有16例陽性(占84.2﹪);6例急性淋巴細胞白血病有3例陽性(占50﹪);5例慢性粒細胞白血病有2例陽性;2例
3、骨髓增生異常綜合征1例陽性;2例急性混合細胞白血病均陽性。Fit<,3>基因外顯子14-15突變:34例血樣標本均擴增出Fit<,3>基因外顯子14-15的靶基因片段,經瓊脂糖電泳顯示3例陽性帶。選擇11例特征性標本測定外顯子14-15的DNA序列,發(fā)現5例突變,其中2例為ITD,內串聯復制重復序列分別為30bp和33bp,編碼10和11個氨基酸;3例均在近膜區(qū)(JM)外顯子14、L<,576P>發(fā)生點突變,其中1例伴有內含子14缺失,
4、長度90bp。10名健康者標本均為陰性。 結論:Fit<,3>基因異常與白血病發(fā)生、發(fā)展相關?;颊咄庵苎獦颖綟lt<,3>基因檢測可作為白血病的診斷,預后判斷分析和微小殘留病灶檢出的標志性基因;急性非淋巴細胞性白血病患者Fit<,3>基因表達強弱與外周血白細胞數呈正相關(P<0.05);FIt<,3>-ITD陽性患者化療緩解率低,易復發(fā),預后差;近膜區(qū)(JM)外顯子14-L<,576P>突變點是否為Flt<,3>基因的一個新的突
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