白血病患者LYL1基因表達水平的定量分析與臨床意義.pdf

1、背景與目的： 白血病(leukemia)是最常見的造血系統(tǒng)惡性腫瘤。我國白血病發(fā)病率為3-4/10萬，在各種惡性腫瘤死亡率中，白血病在男性和女性分別居第6位和第8位，在兒童及35歲以下成人中則居第1位。雖然白血病的發(fā)病機制尚不完全清楚，但是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種與白血病發(fā)病有關(guān)的基因。LYL1基因(lymphoblasticleukemiaderivedsequence1)最早發(fā)現(xiàn)于伴有t(7；19)(q35；p13)染色體易位的急性T淋

2、巴細胞白血病(T-ALL)。該基因編碼一種含有基本螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)域(basic-helix-loop-helixdomain，bHLH)的轉(zhuǎn)錄因子。很多臨床研究顯示LYL1基因在部分T-ALL患者有異常表達，被認為是一個與T-ALL相關(guān)的致癌因子。但最近有學(xué)者注意到LYL1基因在很多急性髓系白血病和骨髓增生異常綜合征患者以及一些髓系白血病細胞株也有明顯的異常表達。我們選定LYL1基因作為研究的目標，分別應(yīng)用常規(guī)定性逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)

3、(RT-PCR)和熒光實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Q-RT-PCR)檢測了LYL1基因在白血病患者mRNA水平的表達情況，探討LYL1基因在白血病發(fā)病中的作用，以及在白血病的臨床診斷、基因治療中的應(yīng)用潛力。 臨床病例與實驗方法： 1.臨床病例：以山大二院血液科2003年3月至2005年2月收治的初治急性和慢性髓系白血病(AML和CML)和骨髓增生異常綜合征(MDS)住院患者共50例為主要研究對象，其中包括AML25例、C

4、ML15例和MDS患者10例。 2.建立常規(guī)定性逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和熒光實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Q-RT-PCR)檢測LYL1基因mRNA表達的方法，并對方法的特異性、靈敏性和重復(fù)性進行測定，用重組質(zhì)粒作為陽性對照繪制標準曲線。 3.應(yīng)用所建立的RT-PCR和Q-RT-PCR法對白血病和MDS患者骨髓標本進行LYL1基因的檢測。10例正常健康人設(shè)為對照組。同時檢測GAPDH作為RNA定量標準。

5、 4.結(jié)合臨床資料分析LYL1mRNA的高水平表達對白血病的治療效果的影響。 5.以SPSS10.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。 結(jié)果： 1、RT-PCR結(jié)果：72％(18/25)急性髓系白血病(AML)患者LYL1mRNA的表達為陽性。4例慢性期慢性粒細胞白血病(CML)患者LYL1mRNA的表達均為陰性，加速期和急變期CML患者中有72.7％(8/11)LYL1mRNA的表達陽性。70％(7/10)骨髓增生異常綜

6、合征患者表達陽性。10例正常健康人LYL1mRNA的表達均為陰性。 2、Q-RT-PCR結(jié)果：LYL1mRNA在正常骨髓細胞中表達水平非常低，但是在大多數(shù)AML、CML和MDS患者中有較高水平的表達。檢測25例初發(fā)的急性髓系白血病(AML)，其中20例(80％)LYL1mRNA的表達水平較正常骨髓標本高2倍以上。15例慢性粒細胞白血病(CML)中慢性期4例表達水平均較低，加速期和急粒變期11例中有8例(72.7％)LYL1mRN

7、A的表達水平較正常人高2倍以上。10例骨髓增生異常綜合征中8例(80％)較正常有2倍以上的增高。 3、RT-PCR與Q-RT-PCR的對應(yīng)關(guān)系：RT-PCR顯示為陽性表達的病例，經(jīng)Q-RT-PCR檢測其LYL1mRNA的表達水平均較正常骨髓標本高2倍以上。兩種方法的檢測結(jié)果基本吻合。 4、LYL1基因的高水平表達見于AML各種亞型、慢性粒細胞白血病加速期和急變期，以及骨髓增生異常綜合征。其中表達水平明顯增高的白血病病例臨

8、床完全緩解(CR)率較低，達到CR的時間也延長。 結(jié)論： 1、我們所建立的LYL1基因Q-RT-PCR檢測方法具有良好的特異性、敏感性和重復(fù)性，對于LYL1基因的實驗與臨床研究是一種較好的基因定量分析工具。2、與正常骨髓相比，70％以上的白血病及骨髓增生異常綜合征病例LYL1mRNA的表達水平有2倍以上增高。對有限病例的Q-RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，LYL1表達水平與白血病患者對治療的反應(yīng)有一定的相關(guān)性。 創(chuàng)新點：