硫化氫對腹主動脈結(jié)扎大鼠心肌肥厚、纖維化的作用研究.pdf

1、背景及目的：硫化氫（hydrogen sulfide, H2S ）是繼一氧化氮(nitrogen monoxidum, NO)和一氧化碳(carbon oxide, CO)之后最近發(fā)現(xiàn)的第三號內(nèi)源性氣體信號分子，對體內(nèi)多種病理生理過程發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。尤其在心血管系統(tǒng)，H2S 具有特定的生理調(diào)節(jié)作用。心肌肥厚是心血管系統(tǒng)常見病變，也是心功能惡化及心源性猝死的獨立危險因素，因而心肌肥厚的消退，能有效的降低心血管疾病的發(fā)病率及死亡率。研究

2、證實，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system, RAS)在心肌肥厚發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。為此，本實驗通過部分結(jié)扎大鼠腹主動脈，建立心肌肥厚模型，進而觀察在H2S 干預(yù)下，心肌肥厚、纖維化的情況，心肌、循環(huán)中血管緊張素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)表達的變化以及心肌縫隙連接蛋白43(Connexin 43, Cx43)含量的變化，從而探討H2S 能否改善壓力超負荷誘導(dǎo)的心肌肥厚、纖維化，以及相關(guān)機制。
　　

3、材料及方法：實驗動物為Sprague-Dawley 8 周齡雄性大鼠(170-190 g)，隨機分為正常對照組(n=10)，假手術(shù)組(n=10)和模型組(n=80)，模型組大鼠按文獻報道行腹主動脈結(jié)扎，1 周后，存活大鼠隨機分為單純結(jié)扎組(n=14)，結(jié)扎+依那普利組(n=14)(依那普利胃飼給藥，5mg/kg/d)，結(jié)扎+硫化氫組(n=14)(硫化氫腹腔注射給藥，14umol/kg/d)。假手術(shù)組只分離腹主動脈，不結(jié)扎，其他處理同模型

4、組。大鼠結(jié)扎后1 周，每天清晨給藥，喂養(yǎng)四周后處死。
　　 分別取腹主動脈血及大鼠心肌做以下檢測：
　　 1.通過左室質(zhì)量指數(shù)(LVW/BW)的檢測，判斷心肌肥厚的情況；
　　 2.通過蘇木素-伊紅染色，檢測心肌細胞最短徑及橫斷面面積，判斷心肌細胞肥大情況；
　　 3.通過天狼星紅染色，從形態(tài)學(xué)上觀察心肌膠原沉積程度及膠原容積分?jǐn)?shù)；通過堿水解法檢測心肌羥脯氨酸的含量，確定各組心肌膠原的含量。
　　

5、 4.通過酶聯(lián)免疫吸附實驗，檢測血漿及心肌組織中血管緊張素-Ⅱ的含量。
　　 5.通過免疫組織化學(xué)方法，檢測心肌縫隙連接蛋白43 表達情況。
　　 6.通過亞甲基藍分光光度法，測定內(nèi)源性H2S的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1、與假手術(shù)組相比，單純結(jié)扎組大鼠左心室重量及左室質(zhì)量指數(shù)升高分別達35.26%(P<0.05)、25%(P<0.05)；較單純結(jié)扎組，依那普利(5mg/kg/d)組左心室重量及左室質(zhì)量

6、指數(shù)各下降了23.4%(P<0.05)、6.38%(P<0.05)。硫氫化鈉(14umol/kg/d，硫化氫的供體)腹腔注射4 周后，左心室重量及左室質(zhì)量指數(shù)各下降了14.9%(P<0.05)、4.49%(P<0.05)。
　　 2、較假手術(shù)組，模型組大鼠心肌細胞橫斷面面積增大了94.59%（P<0.01)。較單純結(jié)扎組，依那普利組心肌細胞橫斷面面積減小了25.48%(P<0.05)。同時，硫氫化鈉腹腔注射4 周，心肌細胞面積減

7、小了15.97%(P<0.05)。
　　 3、較假手術(shù)組，模型組大鼠膠原容積分?jǐn)?shù)增加了60%(P<0.05)，心肌羥脯氨酸含量增加了58%(P<0.05)。給予依那普利及硫化氫喂養(yǎng)4 周后，較單純結(jié)扎組，左心室心內(nèi)膜、心外膜下心肌膠原密度明顯降低，膠原容積分?jǐn)?shù)分別減少了24%(P<0.05)、17.9%(P<0.05)，心肌羥脯氨酸含量分別減少了31.4%(P<0.05)、39.1%(P<0.05)。
　　 4、單純結(jié)扎

8、組心肌Ang-Ⅱ的表達較假手術(shù)組升高了29.3%（P<0.05)；依那普利組較單純結(jié)扎組含量降低了12.28%(P<0.05)，硫化氫組較單純結(jié)扎組含量降低了17.47%(P<0.05)，而血漿Ang-Ⅱ表達在各組間無明顯差異(P>0.05)。
　　 5、單純結(jié)扎組大鼠心肌縫隙連接蛋白43的表達明顯下降；而依那普利組及硫化氫組較單純結(jié)扎組明顯改善。
　　 6、腹主動脈結(jié)扎術(shù)后5 周，較假手術(shù)組，內(nèi)源性H2S含量下降了7.

9、65%(P<0.05)。較單純結(jié)扎組，依那普利組內(nèi)源性H2S含量升高了4.27%(P<0.05)；同時，給予NaHS 喂養(yǎng)4 周，內(nèi)源性H2S含量升高了3.65%(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、腹主動脈結(jié)扎大鼠左室明顯肥厚，纖維化程度明顯升高，依那普利(5mg/kg/d)及硫化氫(14umol/kg/d)明顯減弱左室肥厚，降低了心肌纖維化。
　　 2、腹主動脈結(jié)扎大鼠縫隙連接蛋白43 表達量下降，依那