IL13Ra2及Nanog基因在人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中表達(dá)及意義.pdf

1、目的:觀察U251膠質(zhì)瘤干細(xì)胞在體外的生長(zhǎng)特征;分析IL-13Ra2及Nanog基因在人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中表達(dá)及意義,為進(jìn)一步研究腦膠質(zhì)瘤靶向治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中腦腫瘤干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定:U251細(xì)胞株,分別應(yīng)用含血清培養(yǎng)(DMEM/F12+10％FBS)和無(wú)血清培養(yǎng)基(DMEM/F12,添加bFGF和EGF)培養(yǎng),通過(guò)無(wú)血清懸浮培養(yǎng)方法,從膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251中分離培養(yǎng)腫

2、瘤干細(xì)胞,觀察其增殖、分化,用免疫熒光法鑒定腦腫瘤干細(xì)胞特異性標(biāo)志物CD133。
　　 2.用Trizol提取細(xì)胞總RNA,采用RT-PCR法分別檢測(cè)IL-13Ra2及Nanog基因在U251和膠質(zhì)瘤干細(xì)胞上的表達(dá)情況,利用凝膠電泳成像系統(tǒng)拍照并分別測(cè)定各陽(yáng)性條帶的積分光密度(IOD)值,計(jì)算出相對(duì)比值進(jìn)行半定量比較。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(t檢驗(yàn)),判斷IL-13Ra2及Nanog基因表達(dá)情況有無(wú)差異。
　　 結(jié)果:
　

3、　 1.從膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251中成功培養(yǎng)分離出了膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,在無(wú)血清培養(yǎng)狀態(tài)下呈懸浮生長(zhǎng),經(jīng)免疫熒光鑒定這些腫瘤球呈CD133陽(yáng)性。
　　 2.通過(guò)RT-PCR法檢測(cè),IL-13Ra2在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中表達(dá)量為0.423+0.031,而在U251細(xì)胞中表達(dá)量為0.213±0.029,兩者存在差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=11.022,p<0.01)。Nanog在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中表達(dá)量0.498±0.067,而在U251細(xì)胞中表達(dá)量為0