融合蛋白K88ac-STⅡ和VP4-STI對實驗小鼠的免疫效果研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文采用IPTG誘導法分別對重組菌株BL21(DE3)(pET28a-K88ac-STⅡ)和BL21(DE3)(pTHioHisB-VP4-STI)進行誘導培養(yǎng)。后行SDS-PAGE和Western-blot檢測，在表達蛋白鑒定的基礎之上，通過透析的方法對目標蛋白進行純化回收。用PEG6000調整定量蛋白的濃度均為lmg/mL,加入Al(OH)3，至10％作為鋁膠疫苗，加入預先制備好的熱敏感腸毒素LTB(heat-labileenter

2、otoxinsubunitB)至20ug/mL作為預制實驗疫苗。分別以預制疫苗、鋁膠疫苗、純化蛋白K88ac-STⅡ/VP4-STI和PBS免疫小鼠，優(yōu)化檢測免疫抗體水平的間接ELISA條件，通過比較四個免疫組的抗體水平，結合攻毒實驗和免疫病理變化來評價表達蛋白作為免疫抗原的有效性和熱敏感腸毒素LTB作為免疫佐劑的效果。 結果，兩重組菌株分別在33Kda和40Kda處有特異性表達的蛋白條帶，與預期分子量大小一致，菌株BL21(D

3、E3)(pET28a-K88ac-STⅡ)的表達蛋白能夠被K88ac陽性血清特異性結合，菌株BL21(DE3)(pTHioHisB-VP4-STI)的表達蛋白能夠被VP4陽性血清特異性結合。純化蛋白K88ac-STⅡ/VP4-STI在賦予LTB作為免疫佐劑的條件下能夠有效地誘導小鼠產生針對共免蛋白(K88ac-STⅡ/VP4-STI)的抗體。預制疫苗攻毒存活的小鼠其回腸節(jié)段無明顯的病理變化。 結果表明，融合蛋白K88ac-STⅡ

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