SHH信號傳導(dǎo)途徑在原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元氧化應(yīng)激中的保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討SHH信號傳導(dǎo)途徑在原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元氧化應(yīng)激中的保護(hù)作用。
　　 方法：本實驗在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院協(xié)和醫(yī)院中心實驗室及神經(jīng)內(nèi)科實驗室完成。1.成年雄性SD大鼠行大腦中動脈線栓模型缺血3天，Real-time PCR以及Western-blot方法比較梗死側(cè)與非梗死側(cè)Shh、Patched、Gli-1的表；2.取出生后1－3天SD新生鼠皮層神經(jīng)元進(jìn)行原代培養(yǎng)，給予過氧化氫摸擬氧化應(yīng)激，Real-time PCR以及

2、Western-blot測定內(nèi)源性Shh、Patched、Gli-1的表達(dá)，并就Shh的來源進(jìn)行探討；3.原代培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元氧化應(yīng)激中給予外源性Shh，及給予Shh信號途徑抑制物Cyclopamine處理，用MTT方法觀察細(xì)胞活力及Hochest染色、流式細(xì)胞學(xué)觀察細(xì)胞凋亡的變化。
　　 結(jié)果：1.梗死側(cè)Shh、Patched、Gli-1在缺血后3天較非梗死側(cè)明顯升高，同既往有關(guān)缺血可誘導(dǎo)Shh的表達(dá)上調(diào)研究相一致；2.皮層神

3、經(jīng)元氧化應(yīng)激時內(nèi)源性Shh、Patched、Gli-1表達(dá)上調(diào)，表明分泌性Shh可來源于神經(jīng)元；3.給予外源性Shh可以明顯增加皮層神經(jīng)元氧化應(yīng)激時細(xì)胞的存活力，減少細(xì)胞凋亡，Cyclopamine可部分抑制該作用。
　　 結(jié)論：缺血性卒中及氧化應(yīng)激可以促進(jìn)Shh的表達(dá)上調(diào)，重新激活Shh信號傳導(dǎo)途徑（Patched、Gli-1表達(dá)上調(diào)），外源性給予Shh增加原代培養(yǎng)的神經(jīng)元在氧化應(yīng)激條件下的存活能力，抑制其凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作