霍亂弧菌LysR家族基因vc2103的功能及其調(diào)控基因的研究.pdf

1、霍亂是一種古老且流行廣泛的急性腸道感染疾病，革蘭氏陰性細(xì)菌霍亂弧菌是引起霍亂的病原細(xì)菌。大量的研究表明，霍亂弧菌的致病能力主要是由霍亂毒素和毒素共調(diào)節(jié)菌毛引起的。
　　 LysR轉(zhuǎn)錄調(diào)控家族是一類被深入研究的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，高度保守且普遍存在于細(xì)菌各種屬中，組成了已知原核生物中最大的DNA結(jié)合蛋白家族，它所調(diào)控的目標(biāo)基因也多樣，在生物代謝，細(xì)胞分裂，群體感應(yīng)，毒力，游動性，固氮，毒素產(chǎn)生，黏附及分泌等方面都發(fā)現(xiàn)有LysR型轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)

2、蛋白的參與。其中大部分的LysR基因具有分支狀的啟動子，并且通過這種結(jié)構(gòu)在激活其目標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的同時抑制自身的轉(zhuǎn)錄。借助于生物信息學(xué)知識，我們發(fā)現(xiàn)霍亂弧菌中約有40個LysR型蛋白。本實驗以霍亂弧菌LysR家族基因vc2103作為研究對象。
　　 首先通過構(gòu)建冷光檢測菌株研究vc2103的調(diào)控模式，研究發(fā)現(xiàn)：LysR家族基因vc2103不但可以抑制自身的表達(dá)而且還可以在醋酸的誘導(dǎo)下激活基因 vc2101(胞壁質(zhì)水解酶調(diào)控因子)

3、的表達(dá)。
　　 通過框內(nèi)敲除的方法分別構(gòu)建vc2103缺失菌株以及vc2100和vc2101缺失的菌株。研究發(fā)現(xiàn)vc2103缺失以及vc2100和vc2101缺失并不影響霍亂弧菌的生長，但是在醋酸存在的情況下，野生型菌株和vc2103缺失的菌株在菌株生長的中后期較未加醋酸的衰亡快；通過Western blot以及乳鼠腸道定殖實驗結(jié)果表明：vc2103缺失后霍亂弧菌毒力基因的表達(dá)以及定殖能力并沒有受到影響，說明vc2103與霍亂弧

4、菌的毒力沒有關(guān)系；在醋酸存在情況下，野生型菌株和vc2103缺失的菌株較無醋酸的時候?qū)Ｆ降目剐杂兴档汀?br>　　 當(dāng)vc2103下游基因vc2100和vc2101缺失后，突變株對利福平的抗性較野生型菌株顯著的增強(qiáng)，在醋酸存在情況下，野生型菌株較無醋酸的時候?qū)Ｆ降目剐越档?，但vc2100和vc2101缺失突變株對利福平的敏感性沒有太大的差異，結(jié)果表明vc2100和vc2101能夠降低菌株對利福平的抗性；通過對細(xì)胞外的胞壁質(zhì)水