溫腎咳喘片對CYP450基因表達的影響及其大鼠體內藥物代謝、代謝組學分析.pdf

1、目的:溫腎咳喘片是由甘草水煎醇沉物、厚樸和蛇床子的超臨界提取物組成的中藥有效部位新藥,具有補脾益氣、化濕止滯、行氣平喘之功效,其主要有效成分有甘草酸、厚樸酚、和厚樸酚、蛇床子素和歐前胡素。CYP450酶系是肝臟中藥物的主要代謝酶,其可誘導或可抑制性是臨床上發(fā)生藥物代謝性相互作用的主要原因,進一步將體現(xiàn)在藥物代謝動力學這一環(huán)節(jié)上。據(jù)報道,厚樸具有腎毒性,其腎毒性有厚樸酚的含量有關,但未深入進行研究,且毒性作用機制不明確,而組方中的甘草具有

2、調和藥性、解毒等功效,因此,對溫腎咳喘片主要成分對CYP450酶系基因表達的影響及藥物動力學的研究,探索厚樸因其腎毒性和組方解毒作用有關的生物標志物,對本藥的開發(fā)和臨床合理使用提供實驗依據(jù)。
　　方法:以HepG2細胞為體外模型,采用實時熒光定量PCR技術分析了溫腎咳喘片主要成分及甘草中常用成分對CYP450酶不同基因的影響:選用SD大鼠,分別單次給予甘草酸、厚樸酚、和厚樸酚、蛇床子素、歐前胡素單體和五種成分混合物(3:4:4:3

3、:3),分別采集給藥前和給藥后1、2、4、6、10、24、30、36、48、54、60小時的血漿,采用UPLC-MS/MS定量檢測血漿中的藥物濃度,并采用R軟件中的PK程序計算各成分單獨用藥與混合使用時藥代動力學的變化:同時選用SD大鼠,分為空白組、厚樸組和全方組,分別給予生理鹽水、厚樸超臨界提取物、混合物(甘草水煎醇沉物:厚樸超臨界提取物:蛇床子超臨界提取物=3:4:3),給藥十三天,分別采集給藥前、給藥后第四、七、十、十三天的尿液樣

4、品,采用UPLC-MS/MS對尿液進行檢測,同時采集第十三天的血清,測定反應肝、腎功能的生化指標(BUN、CRE、GPT、GOT、ALP、TBI),通過R軟件中的MixOmics、SBBS等程序包進行分析,探索厚樸因腎毒性和復方解毒作用的生物標志物。
　　結果:甘草中的甘草酸、甘草素對CYP1A2基因的表達具有誘導作用,甘草苷、甘草混合成分對CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4的表達具有抑制作用,甘草混合成分能誘導CYP2D6

5、的表達,然而,厚樸酚和歐前胡素均能誘導CYP1A2、2E1、3A4的表達,和厚樸酚和蛇床子素能誘導CYP2E1、3A4的表達。和厚樸酚大鼠給藥后,主要以硫酸化、葡萄糖醛酸化代謝產物代謝,與甘草酸、厚樸酚、和厚樸酚、蛇床子素和歐前胡素單獨給藥相比,合并使用時,各成分在體內的持續(xù)時間、半衰期、藥時曲線下面積,達峰時間均有所延長,且藥物的濃度波動也比較小。厚樸提取物單用時對雄性、雌性大鼠均具有腎毒性,產生腎毒性分別與磷酰膽堿、犬尿烯酸、2.8

6、-二羥基嘌呤、二十二碳烯酸和磷酰膽堿、2-羥基戊二酸、2-甲氧基雌酮、四氫皮質酮、407.2785,815.5809,461.1833內源性生物標志物有著較強的相關性;而當厚樸與蛇床子、甘草配伍后的復方對腎臟均不會產生毒性,對雄性大鼠而言,這種變化與磺基酸和同型半胱氨酸內源性生物標志物有關。而厚樸組與復方組比較,主要差異性物質分別為磷酰膽堿、二十二碳烯酸、黃尿酸、同型半胱氨酸、磺基酸、2-酮戊二酸、P甲酚硫酸、3-hydroxytetr

7、adecanedionic acid,453.3484、325.0375內源性生物標志物有關,而相對雌性大鼠來說,并不存在著差異性。
　　結論:溫腎咳喘片主要成分對CYP1A2、2D6、2E1、3A4的表達有著不同程度的影響,這表明溫腎咳喘片與經CYP1A2、2D6、2E1、3A4代謝的藥物合用時存在著藥物間的相互作用,要注意合理用藥。藥物代謝動力學研究結果表明,甘草、厚樸、蛇床子配伍使用時,能延長個有效成分的藥效時間,說明溫腎咳