紅曲膠囊對去卵巢合并D-并乳糖誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松的影響.pdf

1、[目的]：
　　1.檢測紅曲膠囊標(biāo)志性成分洛伐他汀與輔酶Q10的含量;
　　2.采用大鼠去卵巢合并D-半乳糖誘導(dǎo)的老年性骨質(zhì)疏松模型評價(jià)紅曲膠囊的骨藥理學(xué)作用并探討其機(jī)制;
　　3.與雌激素己烯雌酚比較，評價(jià)紅曲膠囊可否代替雌激素臨床應(yīng)用于老年性骨質(zhì)疏松。
　　[方法]：
　　紅曲膠囊標(biāo)志性成分洛伐他汀與輔酶Q10的含量測定:采用高效液相色譜法對紅曲膠囊中洛伐他汀與輔酶Q10的含量進(jìn)行測定，并對其精密度、穩(wěn)

2、定性、重復(fù)性和回收率進(jìn)行考察，制定紅曲膠囊檢測洛伐他汀和輔酶Q10含量的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　大鼠去卵巢合并D-半乳糖誘導(dǎo)老年性骨質(zhì)疏松模型的建立:采用3月齡SPF級(jí)雌性SD大鼠，雙側(cè)去卵巢，并皮下注射D-半乳糖100 mg·kg-1·d-1，為模型組(MOD);同時(shí)設(shè)立假手術(shù)對照組(CON)，給予蒸餾水灌胃;去卵巢組(OVX)，雙側(cè)去卵巢，給予蒸餾水灌胃;已烯雌酚組(DES)，造模后給予已烯雌酚30μg·kg-1·d-1灌胃;和紅曲膠

3、囊組（RYR），造模后給予紅曲膠囊0.5顆/kg/d灌胃給藥，按5 ml·kg-1·d-1灌胃，連續(xù)給藥60天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第13、14天和第3、4天皮下注射鈣黃綠素7 mg·kg-1進(jìn)行骨熒光標(biāo)記。大鼠每周稱重一次;實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，麻醉大鼠后右心室抽血處死大鼠，取血清，檢測總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量;取腦、肝、腓腸肌、比目魚肌稱重，取子宮稱重并做病理切片觀察，取骨標(biāo)本進(jìn)行骨藥理學(xué)檢測及機(jī)制探討。
　　紅曲膠囊骨

4、藥理指標(biāo)的測定及藥物作用機(jī)制的探討:用858 Mini Bionix型材料測試系統(tǒng)分析大鼠右側(cè)股骨（三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)）和第五腰椎（壓縮實(shí)驗(yàn)）的生物力學(xué)性能使用ICP儀檢測其骨鈣、磷含量，用羥脯氨酸試劑盒檢測骨膠原的含量;用Micro CT對右側(cè)股骨和第四腰椎進(jìn)行骨量分析;用半自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)對第四腰椎和右側(cè)脛骨進(jìn)行不脫鈣包埋的松質(zhì)骨（脛骨上段、第四腰椎）和皮質(zhì)骨（脛骨中段）進(jìn)行骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測量。同時(shí)，通過免疫組化法對右側(cè)股骨下段進(jìn)行免疫

5、組化染色，觀察PPARγ的表達(dá)及脂肪面積的大小，進(jìn)行機(jī)制探討。
　　[結(jié)果]：
　　1.紅曲膠囊標(biāo)志性成分洛伐他汀與輔酶Q10的含量測定:
　　(1)洛伐他汀在15.625μg/ml～250μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=5.526X-337.02，R2=0.9999。檢測洛伐他汀平均含量為1.31mg/粒，RSD為0.75％;洛伐他汀的平均回收率為101.87％，RSD為1.57％。
　　(2)

6、輔酶Q10在0.96μg/ml～15.42μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=45423.73X-8975.21，R2=0.9997。檢測輔酶Q10平均含量為6.28μg/粒，RSD為0.96％;輔酶Q10的平均回收率為102.61％，RSD為1.69％。
　　2.紅曲膠囊及各實(shí)驗(yàn)組大鼠一般情況的變化:
　　(1)大鼠體重的變化:實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與CON組相比，MOD組的大鼠體重顯著增加（P＜0.01）。與MOD組相

7、比，DES組體重差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，RYR組體重顯著降低（P＜0.01）。與DES組相比，RYR組體重顯著降低（P＜0.01）。
　　(2)大鼠血脂的變化:與CON組相比，MOD組的CHO、LDL顯著增加(P＜0.01)，TG、HDL明顯下降（P＜0.05）。與MOD組相比，DES組的LDL明顯降低(P＜0.05); RYR組的CHO、HDL、LDL均顯著降低（P＜0.01）。
　　(3)大鼠內(nèi)臟濕重指數(shù)的變化:與CON組相比

8、，MOD組子宮和右腓腸肌的濕重指數(shù)明顯降低(P＜0.05)。與MOD組相比，DES組的子宮指數(shù)顯著增加（P＜0.01）;RYR組子宮指數(shù)有所增加，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(4)大鼠子宮病理切片的變化:CON組子宮飽滿，子宮壁厚;MOD組子宮萎縮，子宮壁薄;DES組與RYR組的子宮厚度均明顯較模型組增加，但RYR組的大鼠子宮增加幅度較小。
　　3.紅曲膠囊及各實(shí)驗(yàn)組大鼠骨生物力學(xué)的變化:
　　(1)股骨生物力學(xué)的變化:

9、與CON相比，MOD組股骨的最大載荷、剛度、最大強(qiáng)度、斷裂強(qiáng)度、彈性模量均明顯降低（P＜0.05），且斜型斷裂面明顯多。與MOD組相比，DES組的最大載荷、剛度、最大強(qiáng)度均明顯增加(P＜0.05); RYR組的各力學(xué)指標(biāo)均有所增加，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(2)腰椎最大壓縮載荷的變化:與CON組相比，MOD組腰椎的最大壓縮載荷明顯降低（P＜0.05）。與MOD組相比，DES和RYR組的最大壓縮載荷有所增加，但差別均無有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

10、。
　　4.紅曲膠囊及各實(shí)驗(yàn)組大鼠骨成分的變化:
　　與CON組相比，MOD組股骨的Ca、P、Hyp均顯著降低（P＜0.01）;而與MOD組相比，OVX組的Hyp顯著增加（P＜0.01）;DES組的Hyp顯著增加（P＜0.01）;RYR組Ca、P、Hyp的含量均顯著增加（P＜0.01）。
　　5.紅曲膠囊及各實(shí)驗(yàn)組大鼠骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的變化:
　　(1)脛骨形態(tài)學(xué)的變化:與CON組相比，MOD組脛骨的％Tb.Ar、T

11、b.Th、Tb.N和Ct.Ar、％Ct.Ar明顯降低(P＜0.05)，Tb.Sp、％L.Pm、BFR/BV和％Ma.Ar、％P-L.Pm、P-MAR和P-BFR/BS、％E-L.Pm明顯增加(P＜0.05)。與MOD組相比，DES組％Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N和％Ct.Ar均顯著增加（P＜0.01），％L.Pm、MAR、BFR/BV和％Ma.Ar、％P-L.Pm、P-BFR/BS均明顯下降(P＜0.05); RYR組％Tb.Ar、

12、Tb.N和％Ct.Ar均顯著增加（P＜0.01），而Tb.Sp、％L.Pm、MAR、BFR/BS、BFR/BV和％Ma.Ar、％P-L.Pm、P-MAR、P-BFR/BS均明顯下降(P＜0.05)。
　　(2)股骨形態(tài)學(xué)的變化:與CON組相比，MOD組的Micro CT指標(biāo)BV/TV、Tb.N、Density、Conn-Dens均顯著降低（P＜0.01），Tb.Sp、SMI均顯著增加（P＜0.01）;與MOD組相比，RYR組的BV

13、/TV、Tb.N、Tb.Th、Density、Conn-Dens均顯著的增加（P＜0.01），Tb.Sp顯著降低（P＜0.01）;而DES組股骨的各項(xiàng)指標(biāo)趨勢與RYR組相一致;另，與DES組相比，RYR組的BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Conn-Dens明顯升高（P＜0.05），Tb.Sp、SMI明顯降低(P＜0.05)。
　　(3)腰椎形態(tài)學(xué)的變化:與CON組相比，MOD組的形態(tài)計(jì)量學(xué)的％Tb.Ar和Tb.N明顯降低，Tb.

14、Sp、Oc.N和％Oc.Pm、％L.Pm、BVF/BS、BVF/BV、BVF/TV明顯增加（P＜0.05）;與MOD組相比，DES組％Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N和Tb.Sp差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但％Oc.Pm明顯降低(P＜0.05);RYR組％Tb.Ar、Tb.N均顯著增加(P＜0.01)，Tb.Sp、Oc.N和％Oc.Pm、％L.Pm、BVF/BS、BVF/BV、BVF/TV則顯著下降(P＜0.01);與DES組相比，RYR組的％

15、Tb.Ar、Tb.N顯著增加，和Tb.Sp和Oc.N和％Oc.Pm顯著降低，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與CON組相比，MOD組的Micro CT指標(biāo)BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Density、Conn-Dens均顯著下降（P＜0.01），Tb.Sp、SMI顯著增大(P＜0.01);而與MOD組相比，RYR組的BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Density、 Conn-Dens均顯著增加（P＜0.01），Tb.Sp、SM

16、I顯著降低;DES組和RYR組的趨勢一致;與DES組相比，RYR組的Tb.N明顯增加（P＜0.05）。
　　6.紅曲膠囊及各實(shí)驗(yàn)組大鼠股骨PPARγ表達(dá)和脂肪面積的變化:
　　CON組股骨下段PPARγ陽性區(qū)域顏色較淺，且數(shù)量較少，而且脂肪空泡較少;MOD組的陽性區(qū)域呈深棕褐色且數(shù)量較多，有大量的空泡狀脂肪細(xì)胞，成片狀分布;DES組陽性區(qū)域顏色較淺，且數(shù)量較少，脂肪空泡數(shù)量亦較少;RYR組陽性區(qū)域顏色較淺，但面積較大，而且脂

17、肪空泡數(shù)量較MOD組少。
　　[結(jié)論]：
　　1.HPLC方法測得紅曲膠囊中洛伐他汀的平均含量為1.31 mg/粒;輔酶Q10的平均含量為6.28μg/粒。方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，回收率高，符合樣品分析要求。
　　2.去卵巢合并D-半乳糖可導(dǎo)致大鼠體重增加，血脂紊亂，股骨和腰椎的力學(xué)性能下降，股骨鈣、磷和羥脯氨酸丟失，脛骨、股骨以及腰椎松質(zhì)骨骨量丟失嚴(yán)重，骨顯微結(jié)構(gòu)嚴(yán)重退化，脛骨皮質(zhì)骨的面積減少，可造成老年性骨質(zhì)疏松。