CRIM1促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌粘附與遷移的功能研究.pdf

1、富含半胱氨酸型運動神經(jīng)元蛋白1（CRIM1）是一類富含半胱氨酸的跨膜蛋白，該蛋白是新發(fā)現(xiàn)的拮抗BMPs蛋白家族的一個成員，早前對于CRIM1的研究主要是在于胚胎和器官發(fā)育以及腎纖維化疾病當(dāng)中?；谄湓缜皥蟮赖墓δ埽覀兺茰y該蛋白可能在癌細(xì)胞的粘附和遷移行為當(dāng)中有著重要的作用，并可能進(jìn)一步影響到癌細(xì)胞的表皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化行為。
　　本文的主要研究內(nèi)容：
　　檢測在不同轉(zhuǎn)染條件下siRNA轉(zhuǎn)染后的沉默效率，通過qPCR，western

2、blot檢測CRIM1的基因和蛋白的表達(dá)量，進(jìn)而篩選出最適siRNA轉(zhuǎn)染條件。結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)染后48h，轉(zhuǎn)染試劑與siRNA體積比在1:1的情況下，A549中CRIM1的表達(dá)水平下調(diào)達(dá)到最佳。
　　通過siRNA轉(zhuǎn)染抑制CRIM1表達(dá)表達(dá)和加入CRIM1多肽誘導(dǎo)處理兩種方式對A549細(xì)胞進(jìn)行處理，用MTT法分析CRIM1對A549細(xì)胞增殖能力的影響，結(jié)果顯示CRIM1對A549細(xì)胞增殖能力無明顯影響；通過傷痕愈合法分析CRIM1對

3、A549細(xì)胞遷移能力的影響，結(jié)果顯示CRIM1對A549細(xì)胞遷移能力為正調(diào)控；通過粘附分析法分析CRIM1對A549細(xì)胞粘附能力的影響，結(jié)果顯示CRIM1對A549細(xì)胞粘附能力為正調(diào)控。得出結(jié)論：CRIM1對A549細(xì)胞的遷移和粘附呈正調(diào)控，而對其增殖無顯著影響。
　　鑒于CRIM1可以影響細(xì)胞的粘附和遷移行為，因此我們懷疑該蛋白參與細(xì)胞EMT。先用TGFβ1誘導(dǎo)A549細(xì)胞發(fā)生EMT后，通過進(jìn)一步實驗分析CRIM1是否參與到A5

4、49細(xì)胞EMT的過程當(dāng)中。結(jié)果顯示CRIM1在EMT過程中呈現(xiàn)蛋白上調(diào)，但CRIM1多肽誘導(dǎo)并不能使細(xì)胞發(fā)生EMT。此外，CRIM1的加入也無法誘導(dǎo)和逆轉(zhuǎn)EMT的發(fā)生。CRIM1沉默后蛋白表達(dá)結(jié)果顯示CRIM1的沉默可以使N-CAD,E-CAD的蛋白表上調(diào)。得出結(jié)論：CRIM1不能直接誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生EMT，它可能并不直接參與到EMT的過程當(dāng)中，但是CRIM1的沉默對于N-CAD,E-CAD蛋白的表達(dá)有影響。
　　我們構(gòu)建了原癌基因Y