共調(diào)節(jié)因子介導(dǎo)氯氰菊酯抗雄激素效應(yīng)的機(jī)制研究.pdf

1、環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(endocrine disrupting chemicals，EDCs)這一概念從20世紀(jì)90年代被提出，目前仍然是國內(nèi)外關(guān)注和研究的熱點及重點。我國是農(nóng)藥生產(chǎn)和使用大國，其中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的使用呈上升趨勢。研究表明擬除蟲菊酯類農(nóng)藥是一類EDCs，其抗雄激素效應(yīng)及其所引起的男性生殖健康問題逐漸受到重視和關(guān)注。氯氰菊酯是擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的一種，資料顯示氯氰菊酯具有抗雄激素效應(yīng)和雄性生殖毒性。我們前期的研究結(jié)果表明，氯氰

2、菊酯可損傷雄性大鼠生殖系統(tǒng)。進(jìn)一步的機(jī)制研究顯示該農(nóng)藥可以抑制雄激素受體(AR)氨基端(NH2)/羧基端(COOH)相互作用。但與AR轉(zhuǎn)錄激活密切相關(guān)的共調(diào)節(jié)因子是否參與了氯氰菊酯的抗雄激素效應(yīng)尚未見報道。本研究主要應(yīng)用哺乳動物雙雜交實驗揭示AR信號通路中共激活因子類固醇激素受體共激活因子(SRC-1)和共抑制因子甲狀腺激素受體沉默調(diào)節(jié)因子(SMRT)、核受體共抑制因子(NCoR)在氯氰菊酯抗雄激素效應(yīng)中的作用。
　　目的：建立哺

3、乳動物雙雜交實驗，用于研究AR與共調(diào)節(jié)因子的相互作用，并應(yīng)用該方法研究氯氰菊酯對AR與共調(diào)節(jié)因子相互作用的影響，闡明氯氰菊酯是否通過干擾共調(diào)節(jié)因子的募集產(chǎn)生抗雄激素效應(yīng)，并引起雄性生殖毒性。
　　方法：建立以氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)為報告基因的哺乳動物雙雜交實驗。將表達(dá)AR氨基端質(zhì)粒pVP16-NH2、表達(dá)共激活因子質(zhì)粒pM-SRC-1和報告基因質(zhì)粒PG5-CAT共轉(zhuǎn)染CV-1細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后用氯氰菊酯染毒，通過檢測該物質(zhì)作用下CA

4、T的蛋白表達(dá)水平，研究氯氰菊酯是否抑制AR和SRC-1的相互作用。將表達(dá)AR氨基端質(zhì)粒pVP16-NH2、表達(dá)共抑制因子質(zhì)粒pM-SMRT或pM-NCoR和報告基因質(zhì)粒PG5-CAT共轉(zhuǎn)染CV-1細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后用氯氰菊酯染毒，通過檢測該物質(zhì)作用下CAT的蛋白表達(dá)水平，研究氯氰菊酯是否促進(jìn)AR和共抑制因子SMRT、NCoR的相互作用。
　　結(jié)果：研究氯氰菊酯對SRC-1的作用時，氯氰菊酯在10-7M-10-5M濃度范圍內(nèi)使CAT的表達(dá)

5、量降低，在10-5M時差異有統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果表明氯氰菊酯可能抑制AR與共激活因子SRC-1的相互作用;研究氯氰菊酯對共抑制因子SMRT和NCoR的作用時，氯氰菊酯在10-7M-10-5M濃度范圍內(nèi)使CAT的表達(dá)量升高，在10-5M時差異有統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果表明氯氰菊酯可能增強(qiáng)AR與共抑制因子SMRT和NCoR的相互作用。
　　結(jié)論：氯氰菊酯屬于AR拮抗劑，可能通過抑制AR與共激活因子SRC-1的相互作用，并增強(qiáng)AR與共抑制因子SMR