氯氰菊酯對小鼠垂體LβT2細(xì)胞分泌促性腺激素干擾作用的機制研究.pdf

1、研究背景:擬除蟲菊酯殺蟲劑高頻、廣泛應(yīng)用于工農(nóng)林業(yè)和家庭室內(nèi)除蟲，在農(nóng)產(chǎn)品及家居環(huán)境中普遍殘留。氯氰菊酯是目前使用最為廣泛的Ⅱ型擬除蟲菊酯。研究發(fā)現(xiàn)擬除蟲菊酯是一類內(nèi)分泌干擾物，對哺乳動物的下丘腦-垂體-性腺軸有干擾作用。下丘腦-垂體-性腺軸對哺乳動物以及人類的生長發(fā)育、性成熟、生殖等有至關(guān)重要的作用。由垂體分泌的促性腺激素是啟動性成熟和調(diào)控生殖功能的關(guān)鍵激素，促性腺激素包括卵泡刺激素(FSH)和黃體生成素(LH)。FSH和LH蛋白分別

2、由α亞基和β亞基組成，二者共用相同的α亞基由Cgα基因編碼，β亞基由FSHβ和LHβ亞基編碼。動物研究表明，氯氰菊酯以及其他擬除蟲菊酯能夠引起雄性小鼠或大鼠體內(nèi)FSH、LH水平上升。人類流行病學(xué)調(diào)查也發(fā)現(xiàn)，男性體內(nèi)的擬除蟲菊酯代謝產(chǎn)物與FSH、LH水平呈正相關(guān)。然而目前關(guān)于擬除蟲菊酯對垂體分泌促性腺激素干擾作用的機制尚不清楚。
　　研究方法:以目前最為廣泛使用的Ⅱ型擬除蟲菊酯——氯氰菊酯為研究對象，采用小鼠垂體瘤細(xì)胞系LβT2細(xì)胞

3、為研究模型，應(yīng)用實時熒光定量PCR、WesternBlotting、ELISA等實驗技術(shù)，檢測FSHβ、LHβ和Cgα基因表達(dá)、FSH和LH蛋白水平，利用特異性抑制劑研究信號通路，探討氯氰菊酯對LβT2細(xì)胞合成FSH和LH的干擾作用以及分子機制。
　　研究結(jié)果:LβT2小鼠垂體細(xì)胞暴露1nM，10nM，100nM的氯氰菊酯24h，細(xì)胞活性(cellviability)沒有顯著變化，表明氯氰菊酯在此實驗濃度下對LβT2細(xì)胞沒有毒性作

4、用。LβT2細(xì)胞中FSHβ、LHβ和Cgα的mRNA表達(dá)水平隨著1nM，10nM，100nM的氯氰菊酯暴露濃度增加顯著上調(diào)，細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)液中FSH和LH蛋白含量也明顯上升。進一步的信號通路研究發(fā)現(xiàn)，氯氰菊酯不通過GnRH受體/磷脂酶C/IP3信號通路或者Na+通道作用，而是通過激活L型Ca2+通道和抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+-ATP酶活性，誘導(dǎo)胞質(zhì)內(nèi)Ca2+濃度上升，激活PKC/c-Raf/鈣調(diào)蛋白/ERK通路，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子Egr-1、c-F