人DAF、CD59基因特異表達(dá)載體的構(gòu)建及其在豬血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的研究.pdf

1、我們課題組將建立在血管內(nèi)皮細(xì)胞特異表達(dá)人雙補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白（CD59和DAF）的轉(zhuǎn)基因豬.構(gòu)建攜有人ICAM-2啟動(dòng)子的CD59、DAF基因的特異表達(dá)載體,以及在豬血管內(nèi)皮細(xì)胞（PEC）檢測(cè)重組基因的表達(dá),是建立此轉(zhuǎn)基因豬的上游工作.我們課題組業(yè)已完成的工作：①?gòu)娜搜蚪M中克隆了ICAM-2啟動(dòng)子片段,克隆了CD59基因第一內(nèi)含子起增強(qiáng)子作用的DNA片段,與國(guó)外惠贈(zèng)的CD59cDNA基因重組,構(gòu)建了pcDNA3-En-ICAM2-CD59

2、cDNA表達(dá)載體及不含增強(qiáng)子pcDNA3-ICAM2-CD59cDNA表達(dá)載體.②類似上述的方法,構(gòu)建了人ICAM-2作啟動(dòng)子的DAF基因表達(dá)載體.pcDNA3-ICAM2-Intronl-DAFcDNA.③分別構(gòu)建了檢測(cè)ICAM-2啟動(dòng)子活懷及包括內(nèi)含子片段在內(nèi)的啟動(dòng)子活性的綠色熒光蛋白報(bào)告基因.④培養(yǎng)并鑒定豬血管內(nèi)皮細(xì)胞,培養(yǎng)豬耳成纖維細(xì)胞.用脂質(zhì)體包裹南粒轉(zhuǎn)染方法,將上述表達(dá)載體及報(bào)告基因分別轉(zhuǎn)染豬血管內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞.⑤通過(guò)