冷自體血心臟停搏液對離體兔心肌缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的本研究通過建立離體兔心肌缺血再灌注損傷模型,對比觀察冷自體血心臟停搏液、HTK液和STH液對離體兔心肌缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡的影響,探討冷自體血心臟停搏液對心肌缺血再灌注損傷的心肌保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法選擇健康普通實(shí)驗(yàn)級大白兔45只,體重在(2000-2600g),雌雄不拘。隨機(jī)分為3組:冷自體血心臟停搏液A組(CABC組,n=15)、康斯特液B組(HTK組,n=15)及改良托馬斯心臟停搏液C組(STH液組,n=15)。HT

2、K液組和STH液組經(jīng)開胸后直接于主動脈及肺動脈根部切斷取出心臟;CABC組需開胸后于主動脈根部先快速抽血(按晶體母液與血液1∶4比例配置CABC停跳液),抽血完成后立即浸入備好的冰屑中備用。各組兔心臟取出后均以4℃左右的K-H液連接于主動脈根部沖洗(以減少對后期心臟停跳與復(fù)跳的影響),然后迅速連接于自制的 Langendorff灌注裝置,灌注15min左右以達(dá)平衡狀態(tài)為宜;然后各組分別灌注4℃(15ml/kg)的CABC、HTK及STH

3、停搏液使心臟停搏,心臟停搏120min,灌注K-H液使心臟復(fù)跳后再灌注30min使其達(dá)到平衡狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,快速從灌注裝置上取下心臟,剪取心尖部心肌組織(約2×3×3cm大小)后,立即放入4％多聚甲醛固定液中固定48H后,于石蠟包埋切片后行免疫組織化學(xué)法和原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL法)對比觀察各組心肌組織細(xì)胞的細(xì)胞凋亡(細(xì)胞核染色后成棕黃色)的變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)法測定心肌細(xì)胞凋亡(caspase-3、bax及bcl-2)數(shù)及T

4、UNEL法觀察凋亡細(xì)胞的數(shù)量和比例。
　　結(jié)果離體兔心臟經(jīng)三組不同心臟停搏液灌注后:1、各組Bcl-2蛋白表達(dá)百分率組間比較:CABC組與HTK組比較,無明顯差異( P>0.05);CABC組與STH組比較,較后者明顯增加,具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001);HTK組與 STH組比較也有明顯增加,具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。2、各組Bax蛋白表達(dá)百分率組間比較:CABC組與HTK組比較,較后者減少不明顯,無統(tǒng)計學(xué)意義(P

5、>0.05);CABC組與STH組比較,較后者有增加,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);HTK組與STH組比較無明顯差異(P>0.05)。各組caspase-3蛋白表達(dá)百分率組間比較:CABC組與HTK組比較,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);CABC組與STH組比較,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);HTK組與STH組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。4、各組凋亡指數(shù)(AI值)表達(dá)百分率組間比較:CABC組與HTK組比較,無明顯差異(P>