暴露亞中毒閾劑量毒死蜱對新生鼠中腦黑質多巴胺能神經(jīng)元線粒體的影響.pdf

1、本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，新生SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱后，小膠質細胞被激活，并持續(xù)到SD大鼠青春期，且在青春期和成年期多巴胺能神經(jīng)元受損傷。已有多項研究表明小膠質細胞的激活可能介導或參與了多巴胺能神經(jīng)元的損傷。以上研究提示我們，暴露亞中毒閾劑量毒死蜱的SD大鼠在其新生期已經(jīng)存在多巴胺能神經(jīng)元損傷的潛在因素。課題組前期研究還發(fā)現(xiàn)新生SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱，腦勻漿超氧化物岐化酶含量減少，丙二醛含量及腦蛋白羰基表達增高，提示腦組織氧

2、化應激可能參與了毒死蜱神經(jīng)毒作用。氧化應激是由于機體高活性分子如氧自由基(reactive oxygen species，ROS)等產(chǎn)生過多、超過了機體清除能力而產(chǎn)生。而ROS的產(chǎn)生主要來源于線粒體，當線粒體損傷時，ROS產(chǎn)生增多，同時線粒體本身又是ROS氧化損傷的靶點，如此可形成線粒體損傷的惡性循環(huán)。所以，本課題在以上研究的基礎上提出假設，亞中毒閾劑量毒死蜱可致新生SD大鼠中腦黑質多巴胺神經(jīng)元線粒體損傷。
　　 目的：探討新生

3、SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱(Chlorpyrifos，CPF)對中腦黑質多巴胺神經(jīng)元線粒體的影響
　　 方法：新生11-14天SD大鼠85只，隨機分組為毒死蜱組(CPF組，n=29)和對照組(n=56)。對照組又分為溶劑二甲亞砜對照組(DMSO組，n=29)和生理鹽水對照組(NS組，n=27)。按照課題組前期方法建立新生SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱的動物模型。動物在注藥完畢后24h、72h、6d處死。①用免疫組化法和Wes

4、ternBlotting法檢測中腦黑質線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ亞基1(NADHdehydrogenase subunit1，ND1)；②免疫組化法檢測中腦黑質細胞色素C(Cytochrome C，Cyt C)；③在72h隨機取毒死蜱組、二甲亞砜對照組中腦黑質用醋酸鈾、硝酸鉛雙重染色法電鏡觀察線粒體超微結構變化；④在72h隨機取毒死蜱組、二甲亞砜對照組中腦黑質用免疫組化染色后透射電鏡下觀察染色酪氨酸羥化酶(TyrosineHydroxylas

5、e，TH)陽性細胞線粒體超微結構變化。所有數(shù)據(jù)用均值士標準差(x±s)表示，所有資料采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)處理。
　　 結果：⑴線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ亞基1即ND1表達有變化，毒死蜱組和對照組比較，表達明顯增多，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；毒死蜱組各時間點表達無明顯差異，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。⑵線粒體呼吸鏈Cyt C表達有變化，毒死蜱組與對照組在72h、6d時間點上比較，表達增多，差異有統(tǒng)計學意義

6、(P<0.05)；實驗組表達隨著各時間點的遞增而遞增，呈時間依賴性，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。⑶醋酸鈾、硝酸鉛雙重染色法電鏡下可見毒死蜱組多巴胺能神經(jīng)元水腫，胞質內容稀少，其內線粒體少見并水腫，有空泡形成；而二甲亞砜對照組多巴胺能神經(jīng)元無水腫，胞質內容豐富，其內線粒體較多，形態(tài)基本正常，呈桿狀和粒狀，無水腫及空泡形成。⑷TH免疫組織化學染色后電鏡下可見毒死蜱組陽性細胞(即多巴胺能神經(jīng)元)內線粒體明顯水腫，有大量空泡形成，數(shù)量較少