電針對帕金森病模型大鼠中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元保護(hù)機(jī)制的研究.pdf

1、目的帕金森病(PD)是一種常見的緩慢進(jìn)展的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，主要見于中老年人，是中老年人致殘的主要原因之一，隨年齡增長其患病率逐漸增高。其病理改變主要是中腦黑質(zhì)致密帶投射到紋狀體的多巴胺(DA)能神經(jīng)元大量死亡。其主要臨床癥狀有靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌強(qiáng)直和姿勢步態(tài)異常等。目前以左旋多巴、多巴胺受體激動(dòng)劑、單胺氧化酶B型抑制劑等藥物為主進(jìn)行治療，但這些藥物均不能緩解病情進(jìn)一步發(fā)展，而且長期使用有較強(qiáng)的毒副作用。外科手術(shù)治療療效不肯定

2、且副作用多，基因治療尚處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段。近年來，針灸作為一種獨(dú)特、安全、方便的治療方法已經(jīng)越來越多地運(yùn)用于臨床，取得了較為肯定的療效。本課題研究電針對PD大鼠旋轉(zhuǎn)行為、中腦黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元數(shù)量以及GDNF、BDNF陽性神經(jīng)元數(shù)量、GDNFmRNA、BDNFmRNA的影響，探討電針對PD治療作用及其作用機(jī)理，為針灸臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法本課題共用Wistar大鼠85只，隨機(jī)分為10只用于正常組、20只用于假手術(shù)組、55只用于造

3、模。采用右側(cè)黑質(zhì)注射微量6-0HDA誘導(dǎo)PD大鼠模型，假手術(shù)組注射等體積的生理鹽水。手術(shù)4周后，腹腔注射阿撲嗎啡(0.5mg/kg)誘發(fā)旋轉(zhuǎn)，記錄30min內(nèi)的旋轉(zhuǎn)次數(shù)，超過7轉(zhuǎn)/min即為成功PD模型。將造模成功的大鼠隨機(jī)分成兩組，即模型組20只，電針組21只。電針組取風(fēng)府、太沖(雙側(cè))進(jìn)行治療，雙側(cè)太沖用28號0.5寸不銹鋼毫針針刺，風(fēng)府用28號1寸不銹鋼毫針針刺，接G6805-2型電針治療儀(右側(cè)太沖與風(fēng)府為一對電極)，連續(xù)波，頻

4、率100Hz，強(qiáng)度1mA，留針15min，每天1次，6天為1療程，療程間間隔1天，連續(xù)治療4療程，治療結(jié)束后取材檢測各項(xiàng)指標(biāo)。 1.行為學(xué)檢測治療結(jié)束后開始行為學(xué)檢測，給受試大鼠腹腔注射APO(0.5mg/Kg)，以誘發(fā)大鼠向健側(cè)(左側(cè))單向旋轉(zhuǎn)。每次在注射AP015min后開始記錄，共記錄30min內(nèi)旋轉(zhuǎn)圈數(shù)，每周1次，連續(xù)4周。 2.黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元數(shù)量行為學(xué)檢測結(jié)束后，大鼠稱重，腹腔注射10％水合氯醛(4ml/k

5、g體重)麻醉，生理鹽水心臟快速灌注約15min，再4％多聚甲醛灌注約30min以內(nèi)固定。取腦，4％的多聚甲醛溶液固定4小時(shí)。取中腦黑質(zhì)、紋狀體兩塊腦組織，自來水沖洗12小時(shí)，梯度酒精脫水。低溫(60℃)浸蠟過夜，分別包埋、連續(xù)切片，片厚6-8μm。常規(guī)免疫組化法檢測陽性神經(jīng)元個(gè)數(shù)，陽性神經(jīng)元判斷標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞漿棕褐色。 3.黑質(zhì)GDNF、BDNF陽性神經(jīng)元數(shù)量取上述切片，分別作常規(guī)免疫組化檢測GDNF、BDNF陽性神經(jīng)元個(gè)數(shù)，陽性神

6、經(jīng)元判斷標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞漿棕褐色。 4.黑質(zhì)GDNFmRNA、BDNFmRNA陽性神經(jīng)元數(shù)量取上述切片，作原位雜交法檢測GDNFmRNA、BDNFmRNA陽性神經(jīng)元數(shù)量：脫蠟、胃蛋白酶消化，經(jīng)預(yù)雜交、雜交，滴加生物素化鼠抗地高辛，滴加生物素化過氧化物酶。DAB顯色：鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，陽性細(xì)胞均為胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，封片。 檢測值統(tǒng)計(jì)處理的結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，通過SPSS11.0軟件包處

7、理。 結(jié)果： 1.電針組大鼠治療后較治療前旋轉(zhuǎn)次數(shù)明顯減少(P＜0.05)，模型組無變化(P＞0.05)。 2.模型組黑質(zhì)內(nèi)TH陽性神經(jīng)元數(shù)量與正常組相比明顯減少(P＜0.01)，電針組與模型組相比TH陽性神經(jīng)元數(shù)量增加(P＜0.05)。 3.模型組和電針組黑質(zhì)內(nèi)GDNF、BDNF陽性神經(jīng)元數(shù)量顯著低于正常組和假手術(shù)組(P＜0.01)，電針組GDNF、BDNF陽性神經(jīng)元數(shù)量高于模型組(P＜0.05)。

8、 4.PD模型組黑質(zhì)GDNFmRNA、BDNFmRNA均顯著低于正常組和假手術(shù)組(P＜0.01)，電針使其有一定程度升高(P＜0.05)。 結(jié)論： 神經(jīng)營養(yǎng)因子是保護(hù)神經(jīng)元和維持神經(jīng)元正常功能的重要物質(zhì)。其中，GDNF和BDNF在保護(hù)DA能神經(jīng)元方面發(fā)揮著重大作用，在PD的治療中顯示出誘人的前景。電針可明顯改善PD大鼠的旋轉(zhuǎn)行為，說明電針對PD有一定治療作用。其可能的治療機(jī)制有：①提高GDNFmRNA、BDNFmRN