海人藻酸誘導(dǎo)Fas-FasL通路的活化及格爾德霉素作用的研究.pdf

1、目的：目前，癲癇發(fā)作的眾多病因中，谷氨酸受體興奮所引起的神經(jīng)元凋亡是其重要的機(jī)制之一。本實驗室以前的研究指出，大鼠側(cè)腦室給予GluR6-KA受體激動劑海人藻酸(Kainic acid，KA)模擬癲癇可以誘導(dǎo)FasL的表達(dá)升高。本實驗旨在研究GluR6-KA受體的激活是否能夠激活FasL的受體Fas及其下游的信號通路并引起細(xì)胞死亡；格爾德霉素(GA)能否抑制GluR6-KA受體激活的FasL/Fas信號通路的活性，并具有保護(hù)神經(jīng)元的作用。

2、
　　 方法：在側(cè)腦室注射海人藻酸模擬的Sprague-Dawley大鼠癲癇模型中，分別給予HSP90的抑制劑格爾德霉素(800μ M)、GluR6的拮抗劑NS102(10mM)，采用免疫印跡、免疫沉淀、免疫組織化學(xué)方法對蛋白質(zhì)以及蛋白質(zhì)之間的相互作用進(jìn)行研究；采用焦油紫染色方法檢測海馬CA1和CA3/DG區(qū)神經(jīng)元的存活與死亡。
　　 結(jié)果：1.側(cè)腦室途徑給予成年大鼠的KA上調(diào)了海馬CA1、CA3/DG區(qū)的FasL表達(dá)，

3、且這種上調(diào)具有時間依賴性。HSP90的抑制劑GA和KA受體亞基GluR6的抑制劑NS102可以抑制FasL的表達(dá)上調(diào)。免疫組化的結(jié)果進(jìn)一步揭示了海人藻酸(KA)特異性激活GluR6-KA受體能夠上調(diào)FasL的表達(dá)，GA能夠抑制GluR6-KA受體激活誘導(dǎo)的FasL表達(dá)上調(diào)。
　　 2.KA誘導(dǎo)的GluR6-KA受體的激活上調(diào)了相關(guān)蛋白與Fas受體的結(jié)合，包括FasL-Fas-FADD-procaspase8即DISC的組裝，RI

4、P1與DISC的結(jié)合及RIP1與RIP3的結(jié)合；GA能夠抑制KA誘導(dǎo)的相關(guān)蛋白與Fas的結(jié)合。
　　 3.KA誘導(dǎo)procaspase8切割成活化的caspase8，Bid切割成活化的tBid，線粒體外膜通透性改變，即Bcl-xL與VDAC的結(jié)合減弱，Bax與VDAC的結(jié)合增強(qiáng)，細(xì)胞色素c從線粒體釋放到胞漿中；GA能夠抑制KA誘導(dǎo)procaspase8和Bid的活化，抑制線粒體外膜通透性的改變，增強(qiáng)Bcl-xL與VDAC的結(jié)合，

5、抑制Bax與VDAC的結(jié)合，進(jìn)而抑制細(xì)胞色素c從線粒體釋放到胞漿。
　　 4.在KA刺激下，釋放的細(xì)胞色素c與procaspas9等形成凋亡小體，并使procaspase9切割成活化的caspase9，進(jìn)而激活caspase3，使PARP降解，執(zhí)行細(xì)胞凋亡；GA能夠通過抑制procaspase9的激活，抑制caspase3的活化并抑制PARP最終抑制細(xì)胞凋亡。
　　 5.焦油紫染色結(jié)果表明GA能夠抑制KA誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元