白芷提取物對(duì)葛根、黃芩、川芎中活性成分生物藥劑學(xué)性質(zhì)—膜透過性的影響及機(jī)理研究.pdf

1、藥物透過腸道的膜通透性質(zhì)是影響藥物口服后經(jīng)胃腸道吸收的主要因素，中藥配伍后可能改變藥物活性成分的膜通透性。
　　本文旨在研究葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷、川芎中阿魏酸的腸道轉(zhuǎn)運(yùn)特性、白芷提取物對(duì)其轉(zhuǎn)運(yùn)制性的影響以及影響機(jī)理。闡明各成分本身的小腸吸收機(jī)理；明確白芷提取物對(duì)三種成分腸吸收的作用特點(diǎn)，總結(jié)其作用規(guī)律；從分子生物角度闡明白芷提取物改變?nèi)N成分腸通透性的作用機(jī)理?？疾彀总铺崛∥锏募?xì)胞毒性及腸黏膜毒性，評(píng)價(jià)其用作腸道轉(zhuǎn)運(yùn)吸收促進(jìn)

2、劑的可行性，為開發(fā)新型輔料—吸收促進(jìn)劑奠定基礎(chǔ)。
　　目的：
　　1.研究白芷提取物對(duì)葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷、川芎中阿魏酸腸道轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，從生物藥劑學(xué)的角度闡明白芷與它藥配伍使用的原理。
　　2.研究葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷、川芎中阿魏酸小腸吸收機(jī)制，結(jié)合白芷提取物對(duì)其腸吸收的影響，探討白芷對(duì)配伍藥物中活性成分腸道轉(zhuǎn)運(yùn)的影響規(guī)律。
　　3.研究白芷提取物對(duì)細(xì)胞間緊密連接蛋白、外排蛋白（P-gp）、細(xì)胞膜流動(dòng)

3、性等腸道轉(zhuǎn)運(yùn)屏障的影響，從細(xì)胞、蛋白分子等水平上探討白芷提取物對(duì)腸吸收轉(zhuǎn)運(yùn)阻力的易化作用，從分子機(jī)理水平闡明白芷改變配伍藥物活性成分膜通透性的作用機(jī)理。
　　4.研究白芷提取物的毒性，探索白芷活性成分用作腸道轉(zhuǎn)運(yùn)吸收促進(jìn)劑的可行性，為開發(fā)新型輔料—吸收促進(jìn)劑奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.檢索近年來國內(nèi)外有關(guān)―白芷‖、―配伍規(guī)律‖、―葛根‖、―黃芩‖、―川芎‖、―生物藥劑學(xué)‖、―腸道轉(zhuǎn)運(yùn)‖等文獻(xiàn)，分析綜述中藥復(fù)方配伍規(guī)

4、律、中藥配伍對(duì)藥物腸道轉(zhuǎn)運(yùn)等生物藥劑學(xué)性質(zhì)的影響。
　　2.建立白芷提取物中歐前胡索、異歐前胡索、總香豆素等含量測定方法；采用大孔樹脂分離純化技術(shù)制備白芷提取物；采用水蒸氣蒸餾法制備白芷揮發(fā)油。
　　3.外翻腸囊法、Caco-2細(xì)胞模型及大鼠在體單向灌流法研究白芷提取物對(duì)葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷、川芎中阿魏酸腸道轉(zhuǎn)運(yùn)的變化；分別計(jì)算配伍前后葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷、川芎中阿魏酸表觀滲透系數(shù)（Papp），分析白芷兩個(gè)活性組

5、份對(duì)各相配藥物中有效成分腸吸收的協(xié)同效應(yīng)。
　　4.采用Caco-2細(xì)胞模型及大鼠在體單向灌流法分別研究葛根中葛根、黃芩中黃芩苷、川芎中阿魏酸的腸吸收機(jī)制；并分別以腸微粒體、細(xì)胞間緊密連接調(diào)節(jié)劑（EDTA）、外排蛋白抑制劑為工具，探討各種腸吸收屏障分別在葛根素、黃芩苷、阿魏酸腸道轉(zhuǎn)運(yùn)過程中的參與度。
　　5.運(yùn)用Caco-2細(xì)胞模型，采用高效液相、熒光探針標(biāo)記、蛋白印跡（Western Blot）、流式細(xì)胞等技術(shù)和手段，分別

6、研究白芷提取物對(duì) Caco-2細(xì)胞緊密連接蛋白（ZO-1）、細(xì)胞骨架蛋白（Actin）、P-gp外排蛋白功能及表達(dá)的影響，以及對(duì)Caco-2細(xì)胞膜流動(dòng)性的影響。分析白芷活性成分影響葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷、川芎中阿魏酸生物藥劑學(xué)性質(zhì)的機(jī)理。
　　6.通過病理切片、MTT法以及Caco-2細(xì)胞電阻可逆性測定，研究白芷活性組分對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、組織化學(xué)等的影響，探討白芷活性組分的毒性及其可逆性。
　　結(jié)果
　　1.通過三種方

7、法佐證，得出白芷活性成分能顯著促進(jìn)葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷的腸吸收作用（p＜0.05），而葛根素和黃芩苷均為難吸收藥物，白芷活性成分可能對(duì)配伍對(duì)藥中難吸收成分具有促吸收作用。但白芷活性成分對(duì)穿川芎中阿魏酸的腸吸收影響不明顯。
　　2.分別研究了葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷、川芎中阿魏酸腸吸收特性，明確了葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷及川芎中阿魏酸三個(gè)有效成分腸吸收機(jī)理。得出（1）葛根中葛根素的吸收機(jī)制以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主，同時(shí)存在著主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)

8、，P-gp和MRP蛋白可能為其主要載體并參與載體轉(zhuǎn)運(yùn)的過程。（2）黃芩中黃芩苷的吸收機(jī)制以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主，同時(shí)存在著主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，其轉(zhuǎn)運(yùn)可能不受 P-gp蛋白的影響，MRP蛋白可能為其主要載體并參與載體轉(zhuǎn)運(yùn)的過程。（3）川芎中阿魏酸的轉(zhuǎn)運(yùn)過程存在主動(dòng)載體轉(zhuǎn)運(yùn)，加入緊密連接調(diào)節(jié)劑EDTA后，川芎中阿魏酸腸道轉(zhuǎn)運(yùn)稍有增加，但作用不顯著，印證了其腸道轉(zhuǎn)運(yùn)以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主， P-gp和 MRP蛋白可能為其主要載體并參與轉(zhuǎn)運(yùn)的過程，有關(guān)其吸收機(jī)理有待進(jìn)一

9、步的研究。
　　分別研究了葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷、川芎中阿魏酸在腸微粒體中代謝情況，分別篩選了腸微粒體系中葛根中葛根素、黃芩中黃芩苷、川芎中阿魏酸濃度；進(jìn)一步研究了白芷配伍各藥后，葛根素、黃芩苷、阿魏酸在腸微粒體中代謝情況，得出了白芷各活性成分對(duì)腸微粒體中各代謝酶無影響的結(jié)論。
　　3.采用Caco-2細(xì)胞模型，采用蛋白印跡技術(shù)開展了白芷活性成分對(duì)細(xì)胞間緊密連接蛋白ZO-1及骨架蛋白Actin的影響研究；采用流式細(xì)胞技術(shù)

10、研究了白芷活性成分對(duì)P-gp蛋白表達(dá)的影響；采用熒光探針標(biāo)記法研究了白芷活性成分對(duì)細(xì)胞膜流動(dòng)性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)白芷活性成分可以抑制細(xì)胞間緊密連接蛋白ZO-1和肌動(dòng)蛋白Aactin的表達(dá)；白芷活性成分可以抑制P-gp外排蛋白的功能及蛋白表達(dá)；而白芷活性成分對(duì)細(xì)胞膜流動(dòng)性影響較小，結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），白芷活性成分促進(jìn)配伍藥物中活性成分的腸道轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制可能與細(xì)胞膜流動(dòng)性無關(guān)。
　　4.采用LDH、MTT法、電阻可逆性測

11、定、腸黏膜病理切片，綜合評(píng)價(jià)白芷活性成分的毒性及其可逆性。分析判斷白芷活性成分作為腸道轉(zhuǎn)運(yùn)吸收促進(jìn)劑的可行性。得出白芷活性成分在用量范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞或腸黏膜組織無毒性的結(jié)論。根據(jù)此結(jié)論，我們認(rèn)為白芷活性組分具有開發(fā)為新型輔料——吸收促進(jìn)劑的潛能。
　　結(jié)論
　　采用不同腸吸收模型研究了白芷對(duì)配伍藥物有效成分吸收的影響，得出了白芷對(duì)部分配伍藥物中有效成分具有一定的吸收促進(jìn)作用，初步了解了白芷對(duì)配伍藥物中活性成分生物藥劑學(xué)性質(zhì)的影響