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1、第一部分CDglyTK融合基因殺傷系統(tǒng)腺病毒表達載體的構(gòu)建和初步鑒定;構(gòu)建含TkglyCD重組腺病毒表達載體,觀察其在K562細胞中瞬時表達.方法:TK、CD融合基因TkglyCD從載體pWZLneoCDglyTK中切出,亞克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒中,形成轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pAd track CMV CdglyTK,將之用Pme I酶切線性化后腺病毒基因組質(zhì)粒pAdeasy-1共轉(zhuǎn)化BJ5183菌,抽提重組體腺病毒基因組質(zhì)粒DNA,Pac I酶切后轉(zhuǎn)
2、染293細胞包裝成腺病毒顆粒,采用PCR方法對重組體腺病毒進行鑒定,利用報告GFP基因?qū)Σ《镜味群透腥拘蔬M行測定,Western Blot檢測感染腺病毒的K562細胞中有無目的基因的表達.第二部分CDglyTK融合自殺基因?qū)562細胞殺傷作用的研究;探討已構(gòu)建的CdglyTK融合自殺基因的重組腺病毒載體對K562白血病細胞殺傷作用、旁觀者效應(yīng),并在前體藥物用量、殺傷效力及旁觀者效應(yīng)強弱等方面進行比較,探討其死亡機制,尋找更有效的基因
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