TKglyCD融合基因殺傷系統(tǒng)定向治療K562白血病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分CDglyTK融合基因殺傷系統(tǒng)腺病毒表達(dá)載體的構(gòu)建和初步鑒定;構(gòu)建含TkglyCD重組腺病毒表達(dá)載體,觀察其在K562細(xì)胞中瞬時表達(dá).方法:TK、CD融合基因TkglyCD從載體pWZLneoCDglyTK中切出,亞克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒中,形成轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pAd track CMV CdglyTK,將之用Pme I酶切線性化后腺病毒基因組質(zhì)粒pAdeasy-1共轉(zhuǎn)化BJ5183菌,抽提重組體腺病毒基因組質(zhì)粒DNA,Pac I酶切后轉(zhuǎn)

2、染293細(xì)胞包裝成腺病毒顆粒,采用PCR方法對重組體腺病毒進(jìn)行鑒定,利用報告GFP基因?qū)Σ《镜味群透腥拘蔬M(jìn)行測定,Western Blot檢測感染腺病毒的K562細(xì)胞中有無目的基因的表達(dá).第二部分CDglyTK融合自殺基因?qū)562細(xì)胞殺傷作用的研究;探討已構(gòu)建的CdglyTK融合自殺基因的重組腺病毒載體對K562白血病細(xì)胞殺傷作用、旁觀者效應(yīng),并在前體藥物用量、殺傷效力及旁觀者效應(yīng)強(qiáng)弱等方面進(jìn)行比較,探討其死亡機(jī)制,尋找更有效的基因

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