HuR在結(jié)直腸癌的表達(dá)及其與COX-2及MMP-9表達(dá)的相關(guān)關(guān)系研究.pdf

1、目的： 研究人類胚胎致死視覺異常蛋白(HuR)的表達(dá)情況及其與結(jié)直腸癌相關(guān)基因COX-2、MMP-9表達(dá)的相互關(guān)系，探討HuR在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，進(jìn)一步明確了細(xì)胞漿HuR表達(dá)作為結(jié)直腸癌相關(guān)重要靶蛋白mRNA穩(wěn)定因子的作用，為探討HuR有可能成為腫瘤治療分子途徑的潛在靶點(diǎn)提供依據(jù)。 材料和方法： 1．HuR在不同腫瘤細(xì)胞系的表達(dá)：選擇5種腫瘤細(xì)胞株和一種人正常細(xì)胞株研究HuR的mRNA和蛋白表達(dá)水平。各種

2、腫瘤細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)，利用免疫熒光方法分析HuR蛋白在六種細(xì)胞的表達(dá)定位。提取六種細(xì)胞RNA，應(yīng)用半定量RT-PCR方法檢測六種細(xì)胞HuR mRNA的表達(dá)情況并進(jìn)行比較。 2．HuR在直腸癌的表達(dá)研究：采用高通量、反應(yīng)條件一致的組織芯片，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和原位雜交的方法研究HuR的表達(dá)及其與COX-2基因mRNA的關(guān)系，研究直腸癌組織中HuR蛋白的表達(dá)定位及其表達(dá)與直腸癌不同病理分級的關(guān)系。應(yīng)用原位雜交方法研究直腸癌組織

3、中COX-2 mRNA的表達(dá)，并對HuR漿表達(dá)與COX-2 mRNA的相互關(guān)系進(jìn)行分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用X<'2>檢驗(yàn)。 3．結(jié)直腸癌HuR表達(dá)與MMP-9表達(dá)的關(guān)系：選擇臨床上經(jīng)病理證實(shí)的結(jié)直腸癌病人的癌組織及配對的癌旁正常組織23對及腺瘤標(biāo)本4例，采用RT-PCR的方法檢測MMP-9的表達(dá)，采用免疫組化的方法檢測HuR的表達(dá)，分析MMP-9的mRNA表達(dá)水平與HuR表達(dá)的關(guān)系，同時(shí)分析其與臨床分期的關(guān)系。癌組織和癌旁正常組織M

4、MP-9的表達(dá)采用配對t檢驗(yàn)，MMP-9與臨床分期的關(guān)系采用Kendall等級相關(guān)分析，MMP-9與HuR表達(dá)的相關(guān)性分析采用Mann．Whitney秩和檢驗(yàn)。所有的分析均采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行。 結(jié)果： 1．HuR在不同腫瘤細(xì)胞系的表達(dá)：免疫熒光檢測結(jié)果顯示：LoVo，HT-29，MDA-MB-231，HepG2，3AO和ECV304中HuR蛋白均有表達(dá)，但是在不同腫瘤細(xì)胞的HuR蛋白的分布規(guī)律不同，L

5、oVo及HT-29中HuR蛋白呈明顯的細(xì)胞漿表達(dá)，而MDA-MB-231，HepG2，3AO 3種腫瘤細(xì)胞株主要以細(xì)胞核表達(dá)為主，但是也有細(xì)胞漿表達(dá)。而正常的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系ECV304中HuR蛋白則只在細(xì)胞核表達(dá)。半定量RT-PCR檢測顯示：六種細(xì)胞中HuR mRNA表達(dá)水平?jīng)]有明顯差異，說明HuR在腫瘤細(xì)胞株的胞漿中表達(dá)有其特殊的意義。 2．HuR在直腸癌的表達(dá)研究：組織芯片的免疫組化結(jié)果顯示，直腸癌組織中HuR以細(xì)胞漿表

6、達(dá)為主，且不同病理分級HuR的表達(dá)有顯著性差異，P<0.01。不同病理分級COX-2 mRNA的表達(dá)無顯著性差異，P>0.05；腫瘤組織中細(xì)胞漿HuR表達(dá)與COX-2 mRNA表達(dá)的一致性比較高，具有明顯的相關(guān)關(guān)系，P<0.05，HuR漿表達(dá)與COX-2 mRNA表達(dá)有77.6％的一致性。 3．結(jié)直腸癌HuR表達(dá)與MMP-9表達(dá)的關(guān)系：結(jié)直腸癌組織HuR蛋白，在腫瘤組織主要為細(xì)胞漿表達(dá)為主，而在腺瘤和癌旁正常組織則為細(xì)胞核表達(dá)為

7、主。結(jié)直腸癌組織MMP-9 mRNA的表達(dá)水平在癌組織明顯高于臨近的正常組織，腺瘤組織不表達(dá)MMP-9。MMP-9 mRNA的表達(dá)比值與HuR的胞漿表達(dá)有明顯的正相關(guān)，與腫瘤的lI缶床分級有明顯的正相關(guān)。 結(jié)論： 1．HuR mRNA在不同細(xì)胞的表達(dá)水平無明顯差異，但HuR蛋白在不同細(xì)胞中表達(dá)的部位和規(guī)律不同，在腫瘤細(xì)胞的胞漿分布，與其對許多腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控異常有關(guān)，為進(jìn)一步研究其胞漿表達(dá)與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系奠定了

8、基礎(chǔ)。 2．HuR在直腸癌組織中主要呈細(xì)胞漿表達(dá)，表達(dá)程度隨直腸癌病理分級的增高而增加，并與COX-2 mRNA的表達(dá)有明顯的相關(guān)關(guān)系。HuR的胞漿分布可能與直腸腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系，有待于進(jìn)行進(jìn)一步的功能研究。 3．HuR在結(jié)直腸癌的胞漿表達(dá)與MMP-9 mRNA在結(jié)直腸癌中高表達(dá)有相關(guān)關(guān)系。 HuR在結(jié)直腸癌的胞漿表達(dá)與腫瘤的臨床分級和組織分級有明顯的相關(guān)關(guān)系，其胞漿分布可以使COX-2及MMP-9等A