硫酸軟骨素、前列腺素E2對豬軟骨細(xì)胞增殖分化以及胞內(nèi)鈣響應(yīng)影響研究.pdf

1、骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)是一種常見的不可根治的退行性骨關(guān)節(jié)疾病,發(fā)病時(shí)伴有大量炎癥介質(zhì)前列腺素E2(PGE2)的釋放,至今為止對其具體的發(fā)病機(jī)制仍不是十分清楚。關(guān)節(jié)軟骨是骨關(guān)節(jié)的主要組成部分,軟骨的破壞是骨關(guān)節(jié)炎主要的病理特征。軟骨由軟骨細(xì)胞和軟骨基質(zhì)組成,因此預(yù)防和延緩軟骨細(xì)胞組織的破壞以及了解骨關(guān)節(jié)炎的具體發(fā)病機(jī)制是十分必要的。本研究以正常豬膝關(guān)節(jié)不同層軟骨細(xì)胞為研究對象,考察正常和 OA濃度(低濃度和高濃度)

2、的炎癥介質(zhì) PGE2以及本身作為軟骨基質(zhì)和骨關(guān)節(jié)炎常用保健藥的軟骨基質(zhì)硫酸軟骨素(CS)對OA病變前的軟骨細(xì)胞的影響,為進(jìn)一步了解骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制積累數(shù)據(jù),以及為臨床上更好的預(yù)防和治療骨關(guān)節(jié)炎提供一定的科學(xué)依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)研究主要內(nèi)容和結(jié)論如下:
　　(1)為了得到大量的軟骨細(xì)胞,我們采用0.25％胰蛋白酶、0.3％II型膠原酶逐步消化法分離得到豬膝關(guān)節(jié)淺、中層和深層原代軟骨細(xì)胞。臺盼藍(lán)染色結(jié)果顯示收集的軟骨細(xì)胞存活率約為

3、90％;倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞48 h后完成貼壁,9-10天后融合度達(dá)到80~90％,呈鋪路石樣生長。深層細(xì)胞體積較淺、中層細(xì)胞偏大,形態(tài)相似,呈扁平三角形、多角形。結(jié)果提示獲得的細(xì)胞活性較好,數(shù)量較多,可用于接下來的實(shí)驗(yàn)研究。
　　(2)為了研究正常和OA濃度的炎癥介質(zhì)PGE2以及軟骨基質(zhì)CS對OA病變前的軟骨增殖分化的影響,我們就不同濃度CS和PGE2單獨(dú)以及同時(shí)作用對淺、中層和深層軟骨細(xì)胞增殖分化的影響進(jìn)行考察。結(jié)果顯示2

4、 mg/ml CS、2 mg/ml CS+2.5×10-8 mg/ml PGE2、2 mg/ml CS+10-6 mg/ml PGE2可以顯著促進(jìn)各層正常軟骨細(xì)胞的增殖以及深層軟骨細(xì)胞糖胺聚糖(GAG)的合成,抑制深層軟骨細(xì)胞堿性磷酸酶(AKP)的活性,其中2 mg/ml CS+10-6 mg/ml PGE2對深層軟骨細(xì)胞的促增殖作用顯著大于2 mg/ml CS;不同濃度PGE2對正常軟骨細(xì)胞的增殖分化均無明顯影響。結(jié)果表明CS促進(jìn)軟骨

5、細(xì)胞的增殖和軟骨分化,抑制成骨表型,對關(guān)節(jié)軟骨具有一定的保護(hù)和修復(fù)作用。
　　(3)為了研究正常和OA濃度的炎癥介質(zhì)PGE2以及軟骨基質(zhì)CS對OA病理改變之前的軟骨鈣響應(yīng)的影響,我們就不同濃度CS和PGE2單獨(dú)以及同時(shí)作用對淺、中層和深層軟骨細(xì)胞胞內(nèi)鈣濃度的影響進(jìn)行考察。結(jié)果顯示無CS或PGE2下,淺中層與深層軟骨細(xì)胞的鈣響應(yīng)無明顯差異,但加入CS或/和PGE2后淺、中層軟骨細(xì)胞的鈣響應(yīng)高于深層軟骨細(xì)胞;低濃度PGE2增加淺、中層