硫酸軟骨素酶ABC治療脊髓損傷時(shí)間窗的研究.pdf

1、目的：建立大鼠脊髓半橫斷損傷模型，為研究脊髓損傷后的病理、生理變化過(guò)程及治療效果提供穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，研究硫酸軟骨素酶ABC(ChABC)對(duì)大鼠脊髓損傷修復(fù)的影響，探討ChABC治療脊髓損傷的時(shí)間窗。 方法：1.將150只成年雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為6組制作脊髓半橫斷損傷模型，其中對(duì)照組只行脊髓損傷不給藥物治療。余按照不同給藥時(shí)間分為5個(gè)組：傷后立即給藥組、傷后1d給藥組、傷后3d給藥組、傷后7d給藥組、傷后14d給藥組，分

2、別于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)予鞘內(nèi)注射ChABC治療，n=25。 2.分別在傷前、傷后定期進(jìn)行BBB功能評(píng)分，連續(xù)觀察3個(gè)月脊髓損傷大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況。分別在傷后1w、2w.4w、8w隨機(jī)處死各組大鼠3只，進(jìn)行HE染色及免疫組化GFAP、NG2染色，Western blot檢測(cè)觀察傷后脊髓膠質(zhì)瘢痕組織形態(tài)變化情況及硫酸軟骨素蛋白聚糖(CSPGs)表達(dá)水平。 結(jié)果：1.大鼠脊髓半橫斷損傷模型成功穩(wěn)定，傷口整齊，重復(fù)性好，損傷程度恒定，

3、解剖定位準(zhǔn)確，功能障礙亦確定，便于進(jìn)行脊髓損傷的基礎(chǔ)理論研究和神經(jīng)生物學(xué)觀察。 2.BBB評(píng)分示傷后3d內(nèi)各組大鼠BBB評(píng)分均低至0～1分，各組無(wú)明顯差異(P>0.05)。隨后BBB評(píng)分逐漸增高，脊髓損傷后1～8w脊髓功能恢復(fù)較快，8w時(shí)傷后立即給藥組、1d給藥組、3d給藥組、7d給藥組運(yùn)動(dòng)評(píng)分高于對(duì)照組，差異顯著(P<0.05)，14d給藥組與對(duì)照組差異不明顯(P>0.05)。繼續(xù)觀察至第12w傷后立即給藥組、1d給藥組、3d

4、給藥組、7d給藥組運(yùn)動(dòng)評(píng)分明顯高于對(duì)照組，差異顯著(P<0.05)，14d給藥組與對(duì)照組差異不明顯(P>0.05)。 3.HE染色顯示：傷后對(duì)照組大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞大量增生，膠質(zhì)瘢痕及空洞形成。治療組可見(jiàn)到膠質(zhì)瘢痕比對(duì)照組形成較輕。免疫組化顯示：傷后各組脊髓損傷區(qū)GFAP的表達(dá)均增高，各組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，說(shuō)明ChABC對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞沒(méi)有直接作用。 4.經(jīng)NG2免疫組化、Western blot檢測(cè)發(fā)

5、現(xiàn)：CSPGs的表達(dá)水平傷后即增高，2w達(dá)到高峰。1w時(shí)傷后立即給藥組、1d給藥組、3d給藥組、7d給藥組CSPGs明顯低于對(duì)照組，差異顯著(P<0.05)，14d給藥組與對(duì)照組差異不明顯(P>0.05)。2w時(shí)傷后立即給藥組、1d給藥組、3d給藥組、7d給藥組CSPGs明顯低于對(duì)照組，差異顯著(P<0.05)，14d給藥組與對(duì)照組差異不明顯(P>0.05)。4w時(shí)傷后立即給藥組、1d給藥組、3d給藥組、7d給藥組CSPGs明顯低于對(duì)照

6、組，差異顯著(P<0.05)，14d給藥組與對(duì)照組差異不明顯(P>0.05)。 結(jié)論：1.大鼠脊髓半橫斷損傷模型可重復(fù)性高，一致性好；保留二便功能，并發(fā)癥少，動(dòng)物長(zhǎng)期存活率高；適合進(jìn)行脊髓損傷的基礎(chǔ)性神經(jīng)生物學(xué)研究。 2.ChABC能促進(jìn)鼠脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)，ChABC能在大鼠脊髓損傷后抑制膠質(zhì)瘢痕形成，并能促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的修復(fù)。 3.ChABC治療大鼠脊髓損傷呈時(shí)效依賴(lài)性，傷后立即應(yīng)用效果最好，傷后1周內(nèi)治療