嘌呤核苷酸代謝電化學(xué)檢測系統(tǒng)的建立及應(yīng)用研究.pdf

1、目的：研究倉鼠肺細(xì)胞（V79細(xì)胞）的電化學(xué)行為，考察不同因素對 V79細(xì)胞電化學(xué)信號的影響，建立細(xì)胞內(nèi)嘌呤核苷酸代謝電化學(xué)檢測系統(tǒng)。并將此系統(tǒng)用于藥物對V79細(xì)胞次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）基因突變的研究。為HGPRT基因突變電化學(xué)檢測方法的建立提供理論依據(jù)。
　　方法：本文以V79細(xì)胞為實驗細(xì)胞模型，采用循環(huán)伏安法研究了V79細(xì)胞的電化學(xué)行為，采用高效液相色譜法對 V79細(xì)胞的電化學(xué)信號進(jìn)行了歸屬；采用電化學(xué)方法和

2、常規(guī)HGPRT基因突變檢測方法對照研究了藥物致V79細(xì)胞HGPRT基因位點的突變。
　　結(jié)果： V79細(xì)胞裂解液有兩個電化學(xué)信號峰，分別歸屬于鳥嘌呤和黃嘌呤的氧化（0.7 V），以及腺嘌呤和次黃嘌呤的氧化（1.03 V）；檢測最佳條件：pH值7.4，50℃恒溫水浴裂解30 min；對甲磺酸乙酯（EMS）致V79細(xì)胞HGPRT基因位點突變研究結(jié)果顯示，在EMS濃度為1.6 mg·mL-1時，V79細(xì)胞加藥組信號I峰面積在給藥后第4天

3、開始，明顯高于對照組，信號II峰面積在給藥后第5天開始，明顯高于對照組；不同EMS給藥濃度研究發(fā)現(xiàn)，在藥物濃度0.7~1.6 mg·mL-1范圍內(nèi)，隨著藥物濃度的增加，突變率增加，加藥組與對照組的兩個電化學(xué)信號峰面積差值則隨劑量增加而加大。
　　結(jié)論：本課題采用電化學(xué)法檢測到 V79細(xì)胞有兩個明顯信號峰，以此兩個信號峰為指標(biāo)，建立了細(xì)胞內(nèi)嘌呤電化學(xué)檢測系統(tǒng)，并將此系統(tǒng)用于V79細(xì)胞HGPRT基因突變研究中，結(jié)果與常規(guī) HGPRT基