基于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的免修飾電化學(xué)檢測(cè)新方法研究與應(yīng)用.pdf

1、目的:
　　建立一種高靈敏測(cè)定煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的直接電化學(xué)檢測(cè)方法;基于NADH的直接電化學(xué)檢測(cè)法，建立血清總膽汁酸濃度的免修飾電化學(xué)間接檢測(cè)新方法并用于臨床血清標(biāo)本總膽汁酸濃度的測(cè)定和建立血清乙醇濃度的免修飾電化學(xué)間接檢測(cè)新方法。
　　方法:
　　1.NADH的直接電化學(xué)信號(hào)檢測(cè):分別采用循環(huán)伏安法(CV)和示差脈沖伏安法(DPV)對(duì)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)進(jìn)行定性和定量分析。電極為絲網(wǎng)印刷電

2、極(SPCE):工作電極和對(duì)電極由碳漿印制，參比電極為Ag/AgCl電極。
　　2.血清總膽汁酸濃度的測(cè)定:血清標(biāo)本經(jīng)蛋白沉淀后氮?dú)獯蹈?，用PBS復(fù)溶，復(fù)溶液加入3α-羥基類固醇脫氫酶（3α-HSD）溶液和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(NAD+)溶液混勻室溫反應(yīng)10min后滴加于絲網(wǎng)印刷電極上，用示差脈沖伏安法(DPV)進(jìn)行測(cè)定。用該方法測(cè)定35例臨床血清標(biāo)本總膽汁酸濃度，并與臨床酶循環(huán)法對(duì)比。
　　3.血清乙醇濃度的測(cè)定:用

3、PBS對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行稀釋后加入乙醇脫氫酶（ADH）溶液和NAD+溶液混勻，室溫反應(yīng)10min后滴加于絲網(wǎng)印刷電極上，用示差脈沖伏安法(DPV)進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果:
　　1.SPCE檢測(cè)NADH的線性范圍為2.5×10-6～2.0×10-4mol/L，回歸方程Y=0.125X-0.233，相關(guān)系數(shù)r=0.9992，最低檢測(cè)限可達(dá)1.0×10-6mol/L。測(cè)定100.0μmol/L和10.0μmol/L的NADH溶液濃度的變

4、異系數(shù)分別為1.5％和4.2％。
　　2.血清總膽汁酸測(cè)定的線性范圍為5～400μmol/L，回歸方程為Y=0.0038X+0.2739，相關(guān)系數(shù)r=0.9959，最低檢出限為2μmol/L，日內(nèi)變異系數(shù)和日間變異系數(shù)分別為1.1％～5.2％和3.2％～6.1％之間，平均回收率在75％～113％之間。35例臨床血清標(biāo)本總膽汁酸濃度分別采用該方法與臨床酶循環(huán)法測(cè)定，相關(guān)性良好(r=0.9438)。
　　3.乙醇標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定的線性

5、范圍為7.5～250μmol/L，回歸方程為Y=0.0064X+0.0747，相關(guān)系數(shù)r=0.9951;血清乙醇測(cè)定的線性范圍為4～24mmol/L，校正曲線為Y=0.0918X+0.0705，相關(guān)系數(shù)r=0.9987，日內(nèi)變異系數(shù)和日間變異系數(shù)分別為2.0％～4.1％和3.9％～4.6％之間，平均回收率在93％～102％之間。
　　結(jié)論:
　　1.免修飾SPCE直接檢測(cè)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)靈敏度高、重現(xiàn)性好、速