伴晶狀體脫位的Marfan綜合癥的候選基因突變篩查和特異性篩查基因芯片的初步設(shè)計(jì)及驗(yàn)證.pdf

1、本研究擬通過(guò)分析中國(guó)人群MFS患者的臨床表現(xiàn)和檢測(cè)其基因突變情況，豐富國(guó)內(nèi)外MFS的基因組和表現(xiàn)型的相關(guān)研究，為今后MFS的分子診斷提供依據(jù)，也為國(guó)際人類(lèi)基因變異組計(jì)劃提供中國(guó)人群的資料。另一方面，設(shè)計(jì)一款切實(shí)可行的用于MFS產(chǎn)前篩查的基因芯片，為優(yōu)生優(yōu)育護(hù)航。 第一部分伴晶狀體脫位的Marfan綜合癥眼部表型分析 本研究收集了10個(gè)伴先天性晶狀體脫位的Marfan綜合癥家系。所有患者和家庭成員均接受全面病史回顧、眼科檢

2、查(裂隙燈、A超、B超和角膜曲率檢查)和全身檢查(心臟彩超、血同型半胱氨酸檢查等)，檢查結(jié)果以登記表的形式統(tǒng)一詳細(xì)記錄并進(jìn)行匯總分析。眼部的裂隙燈照片分析發(fā)現(xiàn)MFS患者的晶狀體脫位的方向以上方多見(jiàn)。對(duì)患者按年齡分層后，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法分析其角膜曲率和眼軸長(zhǎng)度與正常對(duì)照組有無(wú)顯著性差異。結(jié)果提示在成年組，MFS患者的角膜曲率明顯較正常對(duì)照組小(P＜0.0001)，而眼軸長(zhǎng)度明顯較正常對(duì)照組長(zhǎng)(P=0.040)。這兩項(xiàng)指標(biāo)在未成年組無(wú)顯著性

3、差異(P＞0.05)。這一結(jié)果提示可以考慮將異常扁平角膜列為成年MFS患者診斷的主要標(biāo)準(zhǔn)之一。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)在MFS人群中，房間隔缺損(ASD)的比例相對(duì)較高。但是，ASD是否可以考慮為MFS的一個(gè)心血管表現(xiàn)尚有待進(jìn)一步證實(shí)。 第二部分Marfan綜合癥相關(guān)候選基因的突變篩查 本研究在成功獲得MFS患者的基因組DNA之后，設(shè)計(jì)了66對(duì)PCR反應(yīng)引物，對(duì)Marfan綜合癥相關(guān)候選基因FBN1進(jìn)行了篩查。為提高篩查效率，

4、本研究設(shè)計(jì)了一套篩查策略，按優(yōu)先順序分6組對(duì)FBN1的65個(gè)外顯子及內(nèi)、外顯子連接處進(jìn)行了篩查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)7個(gè)位于FBN1編碼區(qū)的基因突變：3個(gè)為國(guó)內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)(2號(hào)外顯子的c．203G＞T突變；5號(hào)外顯子的c．502T＞C突變和16號(hào)外顯子的c．2096G＞C突變)；4個(gè)為國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)(4號(hào)外顯子的c．364C＞T突變，13號(hào)外顯子的c．1633C＞T，15號(hào)外顯子的c．1879C＞T突變，37號(hào)外顯子的c．4588C＞T突變)。這7個(gè)

5、突變?cè)谡?duì)照的100條染色體中均不存在，排除了單核苷酸多態(tài)性(SNP)的可能。通過(guò)基因型和表現(xiàn)型的相關(guān)分析，本研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)MFS的EL表現(xiàn)型和原纖蛋白-1內(nèi)半胱氨酸殘基的取代或者被取代密切相關(guān)。這一患病人群基因突變多集中在FBN1的前15個(gè)外顯子。MFS患者中，精氨酸到半胱氨酸殘基突變的復(fù)發(fā)頻率明顯高于其它類(lèi)型的突變。另外，本研究還首次報(bào)道了一例位于原纖蛋白-1的N端結(jié)構(gòu)域的FBN1基因突變。 第三部分Marfan綜合癥特異性

6、篩查基因芯片的初步設(shè)計(jì)和驗(yàn)證 在Marfan綜合癥相關(guān)候選基因的突變篩查的基礎(chǔ)上，本研究結(jié)合熒光標(biāo)記單堿基延伸技術(shù)和基因芯片技術(shù)，設(shè)計(jì)了一款用于檢測(cè)MFS的特異性篩查基因芯片。并選取了6種不同突變的病人(8個(gè)突變樣本)進(jìn)行了基因芯片的驗(yàn)證。結(jié)果提示此款芯片具有很高的檢出率(6/6)，和很好的重復(fù)性(2/2)。該芯片可同時(shí)為6種突變提供診斷，為今后設(shè)計(jì)一款多種遺傳病，多個(gè)家系，多個(gè)位點(diǎn)的超高通量集合基因芯片的開(kāi)展提供了依據(jù)，也為M

7、arfan綜合癥特異性產(chǎn)前篩查提供了可能。 結(jié)論 1、本研究報(bào)道了10個(gè)家系的中國(guó)人群MFS患者的臨床表現(xiàn)，并首次采用按年齡分層的方法，系統(tǒng)性的研究了患者的眼部表現(xiàn)。本研究提示成年MFS患者角膜曲率明顯小于正常人群，可考慮將異常扁平角膜作為成年MFS患者診斷的主要標(biāo)準(zhǔn)之一。 2、本研究報(bào)道了的3個(gè)國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)報(bào)道的FBN1的基因突變：c．203G＞T(p．Cys68Phe)，c．502T＞C(p．Cys168Ar

8、g)和c．2096G＞C(p．Cys699Ser)；4個(gè)國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道的突變：c．364C＞T(pArg122Cys)，c．1633C＞T(pArg545Cys)，c．1879C＞T(pArg627Cys)和c．4588C＞T(pArg1530Cys)。 3、本研究通過(guò)對(duì)伴EL的MFS患者的基因型和表現(xiàn)型的相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)MFS的EL表現(xiàn)型和原纖蛋白-1內(nèi)Cys殘基的取代或者被取代密切相關(guān)。這一患病人群基因突變多集中在FBN1的前1